基于Caco-2細(xì)胞單層模型對(duì)芒果苷跨膜相關(guān)影響因素研究.pdf

1、目的：利用Caco-2細(xì)胞單層模型研究芒果苷跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素，篩選促進(jìn)芒果苷吸收的方法和手段。
　　方法：(1)建立Caco-2細(xì)胞單層模型，通過(guò)跨膜電阻測(cè)定和熒光素鈉的通透率對(duì)單層模型的完整性與通透性進(jìn)行評(píng)價(jià)。(2)考察芒果苷、芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒(méi)食子酸等藥物及羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)對(duì)Caco-2細(xì)胞的急性毒性反應(yīng)。(3)建立高效液相色譜法測(cè)定樣本中芒果苷的

2、方法，測(cè)定樣品中芒果苷的濃度。(4)通過(guò)Caco-2細(xì)胞單層模型考察芒果敢的轉(zhuǎn)運(yùn)。(5)通過(guò)Caco-2細(xì)胞單層模型考察芒果葉部分成分芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒(méi)食子酸對(duì)芒果苷跨膜的影響。(6)通過(guò)Caco-2細(xì)胞單層模型考察常用制劑輔料羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)對(duì)芒果苷跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　結(jié)果：(1) Caco-2細(xì)胞單層模型的跨膜電阻大于250Ω·cm-2,熒光素鈉的

3、累積通透率小于4.8μg·h-1·cm-2。(2)在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，芒果苷、高芒果苷、芒果苷苷元、槲皮素、沒(méi)食子酸及羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮等對(duì)Caco-2細(xì)胞無(wú)急性毒性實(shí)驗(yàn)。(3)實(shí)驗(yàn)樣品中芒果苷濃度的測(cè)定方法為：流動(dòng)相為甲醇-0.1％冰醋酸(35:65)；流速1ml·min-1；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)258nm。(4)芒果苷在各個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度：50μg·ml-1、100μg·ml-1、310μg·ml-1、600μg·

4、ml-1下的表觀滲透系數(shù) Papp(×10-8 cm·sec-1)分別為：AP→BL,1.414±0.915、2.271±1.351、2.632±1.576、3.571±1.440，BL→AP,2.632±2.35、3.501±2.433、4.765±3.761、7.178±5.796，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各濃度的吸收外排均無(wú)顯著性差異。(5)芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒(méi)食子酸分別在高、中、低濃度下，芒果苷的轉(zhuǎn)運(yùn)表觀滲透系數(shù)Papp(×10

5、-8cm·sec-1)均具有明顯變化，具體結(jié)果如下，芒果苷苷元：AP→BL，350.877±15.897、526.316±33.601、157.895±11.930；BL→AP，175.439±14.763、350.877±15.727、100.263±17.890，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與對(duì)照組具有顯著性差異；高芒果苷：AP→BL，35.088±7.151、52.632±16.996、5.263±3.273，BL→AP，70.175±8.398

6、、35.088±6.685、17.544±4.533，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與對(duì)照組具有顯著性差異；槲皮素：AP→BL，104.35±15.775、42.63±7.457、52.63±8.935，BL→AP，70.170±10.397、32.630±15.621、25.090±7.991，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與對(duì)照組比較具有顯著性差異；沒(méi)食子酸：AP→BL，52.632±9.887、17.540±3.479、13.045±1.012；BL→AP，17.5

7、34±5.671、7.363±3.714、8.772±3.340，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在高濃度沒(méi)食子酸存在下，芒果苷的表觀滲透系數(shù)與對(duì)照組比較具有顯著性差異。(6)常用輔料羥丙基-β-環(huán)糊精，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000，聚乙烯吡咯烷酮對(duì)芒果苷的轉(zhuǎn)運(yùn)也存在一定影響。其中以羥丙基-β-環(huán)糊精較為顯著，羥丙基-β-環(huán)糊精對(duì)芒果苷轉(zhuǎn)運(yùn)表觀滲透系數(shù)Papp(×10-8cm·sec-1)影響結(jié)果如下：AP→BL，10.297±2.397、5.138

8、±4.557、2.822±1.478，BL→AP，1.823±1.345、3.339±2.897、4.69±3.478，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在高濃度下，羥丙基-β-環(huán)糊精對(duì)芒果苷吸收的表觀滲透吸收存在顯著差異。
　　結(jié)論：芒果苷在過(guò)飽和濃度、飽和濃度及非飽和濃度下，表觀滲透系數(shù)Papp<1×10-6,為吸收不良藥物，吸收率小于20%，各濃度下吸收量及吸收速率沒(méi)有明顯差異，推測(cè)其轉(zhuǎn)運(yùn)存在載體的參與，且具有飽和顯著，經(jīng)計(jì)算其表觀滲透率PDR均

9、小于1.5,推測(cè)芒果苷的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)以外排為主；芒果苷苷元、高芒果苷、槲皮素、沒(méi)食子酸在高、中、低濃度條件下，對(duì)芒果苷的轉(zhuǎn)運(yùn)存在一定影響，芒果苷轉(zhuǎn)運(yùn)表觀滲透系數(shù)均有顯著提高，且PDR<1.5,表明各個(gè)化合物能夠改變芒果苷的轉(zhuǎn)運(yùn)方向，促進(jìn)芒果苷的吸收；藥用輔料羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯吡咯烷酮能夠增加芒果苷的溶解度的同時(shí)，對(duì)芒果苷的轉(zhuǎn)運(yùn)也存在一定的影響，羥丙基-β-環(huán)糊精，聚乙二醇4000對(duì)芒果苷的轉(zhuǎn)運(yùn)存在