4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯對肺腺癌A549細胞增殖和遷移影響及其可能的機制.pdf

1、目的:
　　本研究旨在探討4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-tri-fluoromethyl-phenyl ester,ATPR)對肺腺癌A549細胞增殖和遷移的影響及其可能的機制。
　　方法:
　　選取對數(shù)期生長的A549細胞,分為ATRA(1,5,10,15,20 mg/L)處理組,ATPR(1,5,10,15,20 mg/L)處理組,溶劑對照組和空白對照組,接種于96孔板,用MTT法檢測不同

2、濃度的ATRA或ATPR處理A549細胞3 d后對其增殖的影響。藥物處理A549細胞3 d后,劃痕實驗檢測ATRA或ATPR對A549細胞遷移的影響;免疫熒光實驗檢測ATRA或ATPR對A549細胞中小窩蛋白1(CAV1),維甲類X受體α(RXRα)表達和分布的影響;Western blot實驗檢測不同濃度的ATRA或ATPR對A549細胞增殖(RARs,RXRs)和遷移(MLCK,p-MLC,MLC,p-P38,P38)相關(guān)蛋白表達的

3、影響。同時ML-7處理A549細胞3 d,進一步檢測ML-7對A549細胞中MLCK表達及細胞遷移的影響。
　　結(jié)果:
　　與ATRA組比較,ATPR抑制A549細胞增殖和遷移的能力更加明顯(P<0.05),隨著藥物濃度的增加ATPR抑制A549細胞增殖和遷移的能力逐漸增強。ATRA和ATPR對A549細胞增殖的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為37.35 mg/L和8.76 mg/L,ATRA(5 mg/L)和ATPR(5 m

4、g/L)對A549細胞遷移的抑制率分別為40％和66%。ATPR處理A549細胞3 d后,免疫熒光結(jié)果提示:與溶劑對照組比較,ATPR可以使 A549細胞中 CAV1向胞膜轉(zhuǎn)移,RXRα向胞核集中。ATPR可以使 RARα和RARγ在A549細胞中表達增強,RXRα與RXRγ表達下降,RARβ和RXRβ的表達未見明顯改變,其對RARs和RXRs表達的影響隨著藥物濃度的增加而顯著,提示 ATPR可能通過對 RARs和RXRs表達和分布的影

5、響來抑制 A549細胞增殖。Western blot結(jié)果顯示,與溶劑對照組比較,A549細胞中CAV1,MLCK的表達以及 P38和MLC的磷酸化水平均下降,其作用隨著藥物濃度的增加更明顯(P<0.05),而P38和MLC的表達并未發(fā)生有統(tǒng)計學(xué)意義的改變,MLCK特異性抑制劑ML-7處理A549細胞3 d后,可以顯著抑制其遷移并使MLCK的表達下降(P<0.05),表明ATPR可能通過P38信號通路下調(diào)MLCK的表達,影響MLC磷酸化水