TGFβ基因治療改善環(huán)孢霉素A腎臟毒性中細(xì)胞凋亡及衰老的機(jī)制探討.pdf

1、目的：轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)在環(huán)孢霉素A(CsA)所致腎臟毒性的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。慢性CsA腎臟毒性最主要的病理改變是腎小管萎縮、擴(kuò)張，入球小動脈透明樣變及間質(zhì)纖維化。而小管間質(zhì)纖維化區(qū)域細(xì)胞的過度凋亡導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目減少是發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。同樣，慢性CsA腎病中由于各種損傷因素的影響存在著細(xì)胞衰老的加速。轉(zhuǎn)化生長因子βⅡ型受體-IgGFc(TGFβRⅡ/IgGFc)是一將人類TGFβRⅡ細(xì)胞外區(qū)域與IgGlFc段連接而成的可

2、溶性嵌合蛋白，可在循環(huán)中阻斷TGFβ的活性。本研究旨在探討TGFβRⅡ/IgG Fc基因轉(zhuǎn)染在改善小鼠CsA腎臟毒性中細(xì)胞凋亡及衰老的作用。 方法：雌性ICR小鼠予低鈉飲食，CsA用藥組每日皮下注射CsA 25mg/Kg。在給藥的第1天和第7天，對照組在布比卡因預(yù)處理的脛骨肌處注射50μgpCAGGS-lacZ，干預(yù)組注射等量pCAGGS-TGFβRⅡ/IgGFc，均聯(lián)合電穿孔，給藥兩周或三周后處死。血漿和腎組織中TGFβ1蛋白

3、水平由ELISA法和免疫組化測得，腎組織中TGFβlmRNA水平用Northern blot測定。利用石蠟切片PAS和Masson’s trichrom染色半定量評分評估腎小管損害和腎間質(zhì)纖維化程度。采用TUNEL法檢測腎小管間質(zhì)細(xì)胞凋亡。采用免疫組織化學(xué)的方法檢測腎小球和腎小管問質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑P21、P27的表達(dá)。 結(jié)果：與對照組相比，CsA給藥2周后，血漿、腎臟TGFβ1表達(dá)以及TGFβ1的mRNA水平均

4、達(dá)到最高，小管間質(zhì)病變也逐漸出現(xiàn)。小管間質(zhì)凋亡細(xì)胞、P21和P27表達(dá)以及腎小球P21表達(dá)均顯著增高。3周時，血漿TGFβ1表達(dá)降至正常，腎臟TGFβ1表達(dá)及TGFβ1的mRNA水平雖有所下降，但仍高于正常水平(P<0.05)，小管間質(zhì)病變較2周時明顯加重(P<0.001)。與給藥2周相比，小管間質(zhì)凋亡細(xì)胞和P27表達(dá)進(jìn)一步升高(P<0.001)，P21表達(dá)無論在小管間質(zhì)還是腎小球均有所下降(P<0.01)。TGFβRⅡ/IgGFc干預(yù)

5、組，2周時，血漿及腎組織TGFβ1表達(dá)較CsA組顯著下降(P<0.05)，而TGFβ1的mRNA水平與CsA組相比則無明顯改變，對小管間質(zhì)病變有保護(hù)作用(P<0.05)，小管間質(zhì)凋亡細(xì)胞，P21和P27表達(dá)及腎小球P21表達(dá)均較CsA2周組顯著下降(P<0.001)。3周時，干預(yù)組的血漿、腎臟TGFβ1表達(dá)以及TGFβ1的mRNA水平均較CsA組沒有明顯改變，小管間質(zhì)病變持續(xù)減輕(P<0.001)，上述指標(biāo)也持續(xù)下降(P<0.001)，

6、呈現(xiàn)腎臟保護(hù)作用。小管問質(zhì)損傷程度與凋亡細(xì)胞百分比成正相關(guān)(r=0.804，P<0.001)，間質(zhì)纖維化程度與凋亡細(xì)胞百分比也成正相關(guān)(r=0.906，P<0.001)。 結(jié)論：(1)TGFβRⅡ/IgG Fc基因轉(zhuǎn)染有效抑制了CsA引起的小管間質(zhì)病變；(2)細(xì)胞過度凋亡參與了慢性CsA腎病的發(fā)病，且與小管間質(zhì)損傷及纖維化程度密切相關(guān)。TGFβ1在這一過程中發(fā)揮了重要作用，TGFβRⅡ/IgG Fc的干預(yù)治療可有效抑制上述改變；