CARD9在感染免疫中的作用及基因治療的探討.pdf

1、燒傷感染是燒傷病人治療的難題之一。白色念珠菌(Candida albicans)是引起真菌感染的一個主要的機(jī)會致病菌。對燒傷病人來說，白色念珠菌是主要的真菌感染致病菌，發(fā)病率高，危害性大，尤其對于大面積燒傷病人，白色念珠菌感染往往會給病人帶來致死性打擊。在白色念珠菌感染時，巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞通過模式識別受體識別的真菌細(xì)胞壁的成分，這將觸發(fā)一系列信號級聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致許多轉(zhuǎn)錄因子活化活，包括核轉(zhuǎn)錄因子κB的活化，進(jìn)一步誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子和趨化因

2、子的表達(dá)，以及炎癥反應(yīng)。然而，模式識別受體識別真菌細(xì)胞壁的成分具體機(jī)制目前尚未完全確定。此外，關(guān)于真菌感染誘導(dǎo)的NF-κB激活的確切機(jī)制在很大程度上仍然不確定。
　　 NF-κB是轉(zhuǎn)錄因子家族中控制免疫細(xì)胞炎癥基因表達(dá)的最重要成員之一。在靜息細(xì)胞內(nèi)NF-κB和其抑制因子IκBα緊密結(jié)合，以二聚體的形式，保持在細(xì)胞質(zhì)中。在經(jīng)典的NF-κB激活通路中，許多刺激物可以誘導(dǎo)激活I(lǐng)κB激酶復(fù)合體(IKK)。IKK復(fù)合體的活性取決于IKKα

3、/β的磷酸化和IKKγ的泛素化，當(dāng)IKKα/β被磷酸化，同時IKKγ也被泛素化時，IKK激酶的活性才能被完全激活，激活的IKK可以磷酸化IκBα，進(jìn)而通過泛素化將其降解，釋放出NF-κB，然后NF-κB可以進(jìn)入細(xì)胞核啟動相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮其生物學(xué)作用。雖然已經(jīng)表明，細(xì)菌和病毒感染都可以通過Toll樣受體誘導(dǎo)活化IKK復(fù)合體，激活NF-κB。但真菌感染時如何激活NF-κB的，目前尚不清楚。
　　 連接蛋白CARD9在抗真菌感染中的

4、起著至關(guān)重要的作用，有人報道其通過調(diào)節(jié)Dectin-1/Syk通路來調(diào)節(jié)白色念珠菌引起的NF-κB激活，但其確切機(jī)制尚不清楚。我們在第一部分研究中發(fā)現(xiàn)，CARD9特異性調(diào)節(jié)菌絲形態(tài)的白色念珠菌引起的NF-κB激活，但并不參與酵母形態(tài)的白色念珠菌及β-葡聚糖引起的NF-κB激活。緊接著在第二部分，我們發(fā)現(xiàn)，通過抑制Dectin-2受體，可以特異性抑制菌絲形態(tài)的白色念珠菌誘導(dǎo)的NF-κB激活；而通過抑制Dectin-1受體，可以特異性抑制酵

5、母形態(tài)的白色念珠菌誘導(dǎo)的NF-κB激活；提示菌絲形態(tài)的白色念珠菌通過Dectin-2傳遞信號，而酵母形態(tài)的白色念珠菌通過Dectin-1傳遞信號。然后，我們發(fā)現(xiàn)，菌絲形態(tài)的白色念珠菌通過Dectin-2而非Dectin-1誘導(dǎo)CARD9/Bc110形成復(fù)合體。最后，我們發(fā)現(xiàn)，雖然CARD9和Syk基因通過兩條不同的信號通路調(diào)節(jié)NF-κB的激活，其中Syk參與調(diào)節(jié)IKKα/β的磷酸化，而CARD9參與了IKKγ泛素化。簡而言之，我們的研究

6、闡明了在真菌感染時，CARD9特異性調(diào)節(jié)由Dectin-2受體引發(fā)的信號傳導(dǎo)，而不是由Dectin-1受體受體引發(fā)的信號傳導(dǎo)來激活NF-κB。
　　 膿毒癥是近年來的醫(yī)學(xué)難題之一，迫切需要探討新的治療手段。以往研究發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)作用；免疫細(xì)胞因子白細(xì)胞介素10(IL-10)是細(xì)胞因子分泌的抑制因子，具有很好的抗炎作用。因此，我們構(gòu)建了攜帶小鼠的IL-10(mIL-10)的腺病毒載體，用它來感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

7、(BMSC)，并通過載體上的綠色銀光蛋白來篩選過表達(dá)mIL-10基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC-mIL-10)。隨后，我們運(yùn)用盲腸結(jié)扎穿孔法在小鼠體內(nèi)建立膿毒癥模型，并觀察BMSC-mIL-10在膿毒癥中的治療作用。我們研究發(fā)現(xiàn)，和單純BMSC治療組相比，BMSC-mIL-10可以明顯降低膿毒癥老鼠體內(nèi)炎癥因子的產(chǎn)生，這包括TNF-α，IL-6，IL-1αand IL-1β等，同時，BMSC-mIL-10治療組小鼠的肺部和腎臟炎癥反應(yīng)