PTZ點燃大鼠海馬FAKpY397動態(tài)表達及其與苔蘚纖維出芽關系.pdf

1、目的：通過觀察戊四氮點燃大鼠模型海馬FAKpY397蛋白的動態(tài)表達變化，結(jié)合苔蘚纖維出芽的程度，探討其在苔蘚纖維出芽及癲癇致癇過程中的作用。
　　方法：將135只健康的成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，隨機分為實驗組90只和對照組45只。實驗組每天腹腔注射亞驚厥劑量的PTZ(即戊四氮)—35mg/kg，對照組每天腹腔注射同等量生理鹽水，成功點燃后停止注射(癇性發(fā)作等級評定標準參照Racine標準)。根據(jù)首次腹腔注射

2、后3天，1周，2周，4周和6周將實驗組及對照組分別隨機分為五個亞組。根據(jù)不同的實驗方法及用途再將每個不同的再亞組隨機細分為三個小組:一組用于免疫熒光及免疫組化染色，檢測各不同時間點實驗組與對照組FAKpY397蛋白在海馬的表達分布及表達量的變化;一組用于Western Blot，檢測不同時間點不同組別大鼠海馬區(qū)FAKpY397蛋白總表達量及其變化趨勢;另一組用于Timm染色，檢測海馬苔蘚纖維出芽情況并進行評分。其中實驗組每小組各6只，對

3、照組每小組各3只。
　　結(jié)果：
　　1.動物行為學
　　隨著每天相同亞驚厥劑量PTZ經(jīng)腹腔注射給藥，實驗組大鼠所表現(xiàn)的癇性發(fā)作反應逐漸加重，多數(shù)給藥后第21-28天（23.1±2.3天）被成功點燃。PTZ致癇模型點燃率為93.75％，而死亡率為4.44％。被成功點燃的大鼠可見RacineⅠ至RacineⅢ級的自發(fā)癇性發(fā)作。對照組大鼠未出現(xiàn)癇性發(fā)作，行為正常。
　　2.Western Blot結(jié)果顯示:在PTZ點燃

4、致癇過程中，海馬FAKpY397蛋白總表達量于再PTZ腹腔注射后3d稍下降，1周時開始增加，4周達高峰，6周下降，仍高于對照組。除3天組外（P＞0.05），實驗組各時間點與對照組間比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　3.免疫熒光及組化結(jié)果顯示:FAKpY397在海馬各區(qū)有表達，主要分布于胞漿;免疫組化半定量分析示CA3區(qū)FAKpY397蛋白表達于PTZ腹腔注射后3d開始增加，4周達高峰，6周下降，仍高于對照組。實驗組中除1周

5、組與2周組進行比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），其余各時間點兩兩比較及實驗組與對照組對應時間點比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　4.苔蘚纖維出芽評分
　　對照組CA3區(qū)未見苔蘚纖維出芽或僅見輕微出芽，苔蘚纖維出芽評分在各時間點間兩兩比較均無統(tǒng)計學差異。實驗組CA3區(qū)苔蘚纖維出芽評分從PTZ腹腔注射后3天開始增加，4周時達高峰，6周下降。實驗組中除4周與6周間比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），其余各時間點兩兩比較及實驗