腎上腺髓質(zhì)素前體不同活性肽段在肺動脈高壓形成中的作用.pdf

1、目的 本研究的目的是檢測腎上腺髓質(zhì)素(ADM)前體各活性肽段在左向右分流肺動脈高壓大鼠肺內(nèi)的分布及其含量的變化，為左向右分流肺動脈高壓的分子生物學(xué)理論提供有力的證據(jù)，同時也為ADM通過阻止MAPK這一細(xì)胞增殖的最終途徑來實現(xiàn)其延緩肺動脈高壓發(fā)生的說法提供依據(jù)。 方法 1．wistar大鼠30只，隨機(jī)分為2組，將實驗組大鼠的左側(cè)頸總動脈與頸外靜脈用套管進(jìn)行連接，對照組大鼠僅切開頸部皮膚分別分離頸總動脈和頸外靜脈后縫

2、合皮膚，不進(jìn)行血管連接術(shù)。 2．術(shù)后8周，右心室導(dǎo)管法測取大鼠肺動脈收縮壓；分離心臟為右心室和(室間隔+左心室)，計算二者重量比；HE染色觀察大鼠肺血管的病理變化，測量中等肺動脈的中膜厚度所占管徑百分比。 3．采用免疫組化法和Western blotting測定PAMP、ADM、ADT在大鼠肺組織中的分布及其相對含量變化。 4．RT-PCR法檢測大鼠肺組織中PAMP、ADM、ADT、proADM45-92、p38

3、MAPK、ERK1 mRNA相對表達(dá)量。 結(jié)果 1．本研究采用套管連接血管技術(shù)成功建立了大鼠頸部左向右分流肺動脈高壓模型。 (1)HE染色可見實驗組大鼠肺動脈壁增厚，包括平滑肌層及內(nèi)膜層。對照組大鼠肺動脈管壁厚度正常，內(nèi)膜光滑、連續(xù)。 (2)實驗組大鼠肺動脈收縮壓與對照組比較明顯升高，實驗組大鼠肺動脈相對中膜厚度及右室/(左室+室間隔)比例明顯增加。 2．免疫組化法測定ADM、ADT、PAMP三種

4、活性肽段在兩組大鼠肺內(nèi)的分布及其蛋白表達(dá)可見： (1)ADM、ADT在肺高壓組及對照組大鼠肺組織內(nèi)的分布較一致，棕色顆粒比較顯著的分布于血管平滑肌層，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)則黃染不明顯。 (2)正常對照組大鼠中，PAMP主要分布在肺血管平滑肌細(xì)胞中，蛋白表達(dá)量較低，實驗組大鼠中黃染區(qū)域明顯增加，存在于血管外膜、血管平滑肌細(xì)胞之中。 (3)免疫組化累積光密度顯示，實驗組大鼠肺內(nèi)ADM、PAMP蛋白表達(dá)量增加而ADT含量則降

5、低。 3．RT—PCR法測定結(jié)果可見實驗組大鼠肺組織ADM、proADM45—92 mRNA表達(dá)增強(qiáng)，ADT mRNA表達(dá)減弱，PAMP mRNA無統(tǒng)計學(xué)變化，p38MAPK、ERKlmRNA水平升高。 4．Western blotting測定ADM、PAMP在肺組織中實驗組蛋白相對含量高于對照組，ADT含量降低。 結(jié)論 1．ADM起到延緩左向右分流肺動脈高壓進(jìn)展的作用；本研究首次明確了ADT在肺高壓大鼠

6、肺內(nèi)的分布情況。 2．分布于正常對照組血管平滑肌細(xì)胞中的PAMP在肺動脈高壓形成的過程中被分泌至血管外膜及血管平滑肌中，以阻止肺動脈高壓的進(jìn)程。 3．ADM前體各活性肽段之間在分泌方面的互相抑制及其在生物活性方面的相互影響是proADM各活性肽段分子內(nèi)調(diào)控的一種表現(xiàn)，proADM分子內(nèi)調(diào)控學(xué)說在肺動脈高壓的發(fā)生機(jī)制中起到了重要的作用。 4．ADM通過第二信使cAMP對MAPK信號途徑起到抑制作用，以延緩肺動脈高壓