蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定吉蘭-巴雷綜合癥患者與正常人血清的差異表達(dá)蛋白.pdf

1、目的：吉蘭-巴雷綜合征（GBS）是可能與感染有關(guān)和免疫機(jī)制參與的急性多發(fā)性神經(jīng)病。臨床表現(xiàn)為急性進(jìn)行性，對稱性四肢的遲緩性癱瘓，伴有或者不伴有感覺異常和自主神經(jīng)功能紊亂。其主要病理改變?yōu)橹車窠?jīng)炎癥性節(jié)段性脫髓鞘或軸索變性。由于該病可致呼吸肌麻痹，故病死率較高，國內(nèi)外學(xué)者對此病均高度重視。一般認(rèn)為本病屬自身免疫疾病，病人血液中存在與發(fā)病有關(guān)的抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子等，如能清楚地知道與吉蘭.巴雷綜合征發(fā)病相關(guān)的抗體、補(bǔ)體及細(xì)胞因子究竟是何種

2、蛋白質(zhì)或多肽，則對明確其發(fā)病機(jī)理乃至攻克此疾病有重要的意義。
　　 新近出現(xiàn)的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是生命科學(xué)進(jìn)入后基因組時代的標(biāo)志之一。蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）是指根據(jù)蛋白質(zhì)種類、數(shù)量、以及時間、空間上的變化來研究表達(dá)于細(xì)胞、組織及個體中的全部蛋白質(zhì)（proteome），并從其結(jié)構(gòu)和功能的角度綜合分析生命活動的一門科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)可以比較兩個或更多的樣品之間蛋白質(zhì)水平，是揭示疾病分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)疾病標(biāo)志蛋白，尋找新的藥物靶標(biāo)的

3、理想工具。
　　 由于毛細(xì)血管與人體絕大多數(shù)組織細(xì)胞直接進(jìn)行物質(zhì)與能量交換，故大多數(shù)組織細(xì)胞病理變化可在血清蛋白質(zhì)變化中反應(yīng)出來。血清蛋白質(zhì)組學(xué)是指研究選定的目標(biāo)人群血清中表達(dá)的全部蛋白質(zhì)，在建立正常蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜的基礎(chǔ)上，尋找其差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，鑒定疾病相關(guān)蛋白質(zhì)，進(jìn)而研究其結(jié)構(gòu)和功能，為研究疾病病理生理機(jī)制、尋找早期診斷的特異性標(biāo)志物、藥物作用靶點(diǎn)等開辟新的途徑。
　　 本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對吉蘭-巴雷綜合征患者的血

4、清進(jìn)行研究，旨在發(fā)現(xiàn)吉蘭-巴雷綜合征相關(guān)蛋白質(zhì)，以深入理解吉蘭-巴雷綜合征分子機(jī)制，并為尋找早期診斷、治療吉蘭-巴雷綜合征的有效方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：取吉蘭-巴雷綜合征患者和正常人血清為樣本（各為30例），提取血清蛋白，進(jìn)行雙向凝膠電泳：以固相pH梯度等電聚焦為第一向，垂直十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）為第二向進(jìn)行雙向電泳（2-DE），凝膠固定后以考馬斯亮蘭R250染色，圖像分析軟件ImageM

5、aster 2D Elite分析電泳圖譜，得到匹配的蛋白質(zhì)點(diǎn)；然后酶解膠內(nèi)感興趣的蛋白質(zhì)，所得肽段用基質(zhì)輔助激光解析/電離-飛行時間（MALDI-TOF）質(zhì)譜儀檢測，以得到的肽片段質(zhì)量指紋圖譜檢索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，得出差異表達(dá)蛋白；肽段樣品用MALDI-TOF/TOF-MS/MS質(zhì)譜儀檢測。第1級質(zhì)譜得到的肽片段質(zhì)量指紋圖譜肽質(zhì)量指紋圖譜與第2級質(zhì)譜得到的肽序列信息一起用來檢索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，鑒定匹配上的蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)果：24種蛋

6、白質(zhì)的表達(dá)量在吉蘭-巴雷綜合征患者與正常對照組顯著不同，其中17種蛋白質(zhì)在吉蘭-巴雷綜合征患者血清中表達(dá)量上調(diào)，這些蛋白質(zhì)被鑒定為補(bǔ)體C3，α-2-巨球蛋白，補(bǔ)體因子B，血漿銅藍(lán)蛋白，補(bǔ)體因子H，補(bǔ)體C4-B，維生素D結(jié)合蛋白，血清淀粉樣P物質(zhì)，叢生蛋白，α-1-抗糜蛋白酶，觸珠蛋白，Afamin，血紅素蛋白，視黃醇結(jié)合蛋白4，補(bǔ)體C1s亞成分，補(bǔ)體C4-A，α-2鋅糖蛋白；7種蛋白質(zhì)在吉蘭-巴雷綜合征患者血清中表達(dá)量下調(diào)，這些蛋白質(zhì)被

7、鑒定為α-1-抗胰蛋白酶，Ig γ-1-C鏈恒定區(qū)，Ig κ-C鏈恒定區(qū)鏈，CD5類抗原，載脂蛋白E，血清鐵傳遞蛋白，維生素D結(jié)合蛋白。
　　 結(jié)論：發(fā)現(xiàn)并鑒定了一批GBS的相關(guān)蛋白，這些差異表達(dá)蛋白對深入理解吉蘭.巴雷綜合征的發(fā)病機(jī)制并有望在早期診斷、治療上發(fā)揮作用。其中α-1-抗胰蛋白酶，觸珠蛋白，血漿銅藍(lán)蛋白，血清淀粉樣P物質(zhì)，α-2巨球蛋白，血紅素蛋白，α-1-抗糜蛋白酶和叢生蛋白等都是急性期蛋白的成員，被認(rèn)為是明顯的炎

8、癥，組織損傷或者惡性腫瘤等病理現(xiàn)象的標(biāo)志物。他們的升高可能是GBS急性炎癥反應(yīng)的體現(xiàn)。補(bǔ)體系統(tǒng)的多個成分的升高則進(jìn)一步說明了GBS發(fā)病中免疫機(jī)制的參與。而載脂蛋白E的降低，可能提示GBS患者雪旺細(xì)胞免疫損害后的修復(fù)和再生因Apo-E下調(diào)而發(fā)生障礙，導(dǎo)致周圍神經(jīng)脫髓鞘的結(jié)果。維生素D結(jié)合蛋白是一種免疫調(diào)節(jié)因子，其缺乏導(dǎo)致自身免疫疾病的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)中維生素D結(jié)合蛋白在上升及下調(diào)均出現(xiàn)，可能為不同亞型在GBS的表達(dá)量或升高或降低，提示對其亞型