梓醇對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、魚(yú)藤酮(Rotenone)是一種線粒體抑制類殺蟲(chóng)劑，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有毒性作用，與帕金森病(Parkinson's disease PD)存在著潛在的聯(lián)系。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞如星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元相互作用，相輔相成，共同構(gòu)成了神經(jīng)系統(tǒng)，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)起支持，調(diào)節(jié)作用。梓醇是從中藥地黃中提取的神經(jīng)活性物質(zhì)，屬于環(huán)烯醚萜苷類。本論文以魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞為研究對(duì)象，探究梓醇對(duì)該P(yáng)D模型細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用及其作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如

2、下:
　　(1)從新生小鼠大腦皮層中分離并培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)免疫染色鑒定后，純度都達(dá)到90％以上。用不同濃度的魚(yú)藤酮分別誘導(dǎo)損傷兩種神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，存活率有不同程度的下降，其中星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)魚(yú)藤酮的耐受性較高。
　　(2)用魚(yú)藤酮誘導(dǎo)損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞作為PD細(xì)胞模型，梓醇預(yù)處理半小時(shí)后，檢測(cè)梓醇對(duì)模型細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用。利用MTT法，形態(tài)學(xué)觀察，以及各種生化檢測(cè)方法進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:梓醇

3、能顯著提高魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的存活率，同時(shí)對(duì)其形態(tài)有改善作用。此外，梓醇可降低星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive OxygenSpecies ROS)的生成，增加還原型谷胱甘肽(GSH)的含量，抑制半胱天冬酶Caspase-3的活性，減少胞外谷氨酸的積累。由此可見(jiàn)，梓醇可通過(guò)抗氧化作用，抗凋亡作用，抗谷氨酸興奮性毒性作用來(lái)抵抗魚(yú)藤酮產(chǎn)生的神經(jīng)毒性，進(jìn)而起到神經(jīng)保護(hù)作用。
　　(3)為了進(jìn)一步探討梓醇抗谷氨酸興奮性毒性作用

4、的機(jī)理。我們利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和western blot技術(shù)分別檢測(cè)了梓醇對(duì)魚(yú)藤酮處理后的星形膠質(zhì)細(xì)胞中谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST和GLT-1 mRNA及其轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)量的影響。結(jié)果表明，梓醇可顯著增加受損星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST mRNA及其蛋白的表達(dá)量，但對(duì)GLT-1的表達(dá)量無(wú)顯著影響。此外，通過(guò)檢測(cè)Na+/K+-ATPase活性的改變，我們發(fā)現(xiàn)梓醇可以恢復(fù)由魚(yú)藤酮引起的Na+/K+-ATPase活性的降低，提高谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體

5、的活性。由此可見(jiàn)，梓醇一方面通過(guò)影響谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)量，另一方面通過(guò)影響谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性，來(lái)改善谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能，促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)谷氨酸的攝取，從而降低了胞外谷氨酸濃度，間接地起到保護(hù)神經(jīng)元的作用。
　　以上結(jié)果表明，梓醇可對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用，包括其抗氧化作用，抗凋亡作用，抗谷氨酸興奮性毒性作用。其中抗谷氨酸興奮性毒性作用是與梓醇能影響谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST的表達(dá)以及提高Na+/K+-ATPase活