IL-17對星形膠質(zhì)細胞增殖及活化的調(diào)節(jié)作用及機制研究.pdf

1、目的:研究IL-17對原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞中MIP-1α表達的調(diào)節(jié)作用及其作用機制，為多發(fā)性硬化癥等神經(jīng)炎性反應(yīng)相關(guān)疾病提供潛在的治療靶點。
　　方法:應(yīng)甩Real-time PCR、ELISA法檢測星形膠質(zhì)細胞MIP-1α的表達;RT-PCR檢測IL-17RA在星形膠質(zhì)細胞中的表達;應(yīng)用Western blot檢測IL-17對星形膠質(zhì)細胞Src/MAPK/PI3K/NF-kB信號通路中信號分子的活化及其星形膠質(zhì)細胞活化的標志物

2、GFAP的表達水平;應(yīng)用免疫細胞染色和免疫組織染色技術(shù)檢測原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞和EAE小鼠模型中的GFAP的表達水平。
　　結(jié)果:1）不同濃度的IL-17(25，50，100ng/ml)可顯著誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細胞中MIP-1α水平表達上調(diào);2）IL-17作用于星形膠質(zhì)細胞上的IL-17RA發(fā)揮作用，且這種效應(yīng)可被IL-17RA中和性抗體抑制;3）IL-17能誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細胞中酪氨酸蛋白激酶Src磷酸化，并且Src抑制劑-PP2（但不是

3、其非活性對照物-PP3）預(yù)處理能顯著抑制IL-17引起的星形膠質(zhì)細胞中MIP-1α表達增加;4）IL-17能誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細胞中Src/MAPK/PI3K通路中信號分子磷酸化，Src抑制劑-PP2（但不是其非活性對照物-PP3）預(yù)處理能顯著抑制IL-17引起的星形膠質(zhì)細胞中MAPK和PI3K活化，進一步研究表明ERK，JNK，PI3K特異性抑制劑預(yù)處理均能顯著抑制IL-17引起的星形膠質(zhì)細胞中MIP-1α表達增加;5）IL-17能誘導(dǎo)星形

4、膠質(zhì)細胞中核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化，IKK-2特異性抑制劑SC514預(yù)處理能顯著抑制星形膠質(zhì)細胞中MIP-1α表達增加;6）IL-17可顯著誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細胞中GFAP表達增加且呈時間依賴性變化，且這種效應(yīng)可被MIP-1α中和性抗體抑制;7）整體實驗進一步驗證MIP-1α表達上調(diào)和星形膠質(zhì)細胞活化的相關(guān)性。
　　結(jié)論:IL-17A通過作用原代星形膠質(zhì)細胞中IL-17RA誘導(dǎo)MIP-1α的表達上調(diào)，引起星形膠質(zhì)細胞的活化，其作用機制與