間歇性低氧對發(fā)育期大鼠大腦皮質(zhì)C-FOS、BAX表達(dá)的影響.pdf

1、目的：采用HE，甲苯胺藍(lán)，免疫組化，電鏡等方法，觀察發(fā)育期大鼠間歇性低氧及急性低氧后大腦皮質(zhì)C-FOS、BAX的表達(dá)，旨在探討間歇性低氧對腦缺氧損傷時C-FOS、BAX表達(dá)的影響，為間歇性低氧對發(fā)育期大鼠腦保護(hù)作用的機(jī)制提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　 材料與方法；將新生雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，隨機(jī)分為28天、42天、56天三組，每組又分為對照組、急性低氧組、間歇性低氧組、間歇性低氧+急性低氧組四個小組，共12組。對

2、照組動物不接受任何處理，急性低氧動物取標(biāo)本前給予混合氣體（10％氧氣+90％氮氣）10分鐘，間歇性低氧動物（連同母鼠）置于低壓氧艙，分別接受28、42、56天的相當(dāng)于3000米海拔的減壓低氧處理，每天5小時。分別于第29、43、57天取材。戊巴比妥那麻醉后快速斷頭，開顱取大腦頂葉皮質(zhì)，4％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，用于光鏡及免疫組化研究。電鏡標(biāo)本用2.5％戊二醛固定，餓酸后固定，樹脂包埋，超薄切片，電鏡觀察。
　　 結(jié)果

3、：
　　 1.HE及甲苯胺藍(lán)染色：對照組與間歇性低氧組之間無明顯差異。給予急性低氧后可見神經(jīng)元呈現(xiàn)不同程度的損傷變性的改變，表現(xiàn)為大腦皮質(zhì)正常結(jié)構(gòu)遭到破壞，胞質(zhì)透亮，尼氏體溶解消失，核偏位。同時還可看到神經(jīng)元胞體縮小，胞核固縮深染，細(xì)胞呈三角形。細(xì)胞周圍間隙明顯增寬，損害嚴(yán)重的細(xì)胞呈空泡狀。給予間歇性低氧加急性低氧后：大腦項葉皮質(zhì)神經(jīng)元可見一定程度病理損傷，表現(xiàn)為胞體腫脹，尼氏體邊聚，缺氧損傷明顯減輕。這一結(jié)果顯示間歇性低氧在腦

4、缺氧損傷中提供神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 2.免疫組化結(jié)果
　　 2.1 BAX：BAX蛋白免疫陽性細(xì)胞呈黃色，主要位于細(xì)胞漿內(nèi)，胞核也可看到，染色呈顆粒狀或條索狀。56天對照組：胞漿內(nèi)顆粒狀免疫反應(yīng)產(chǎn)物較少見，其OD值為0.1239±0.0054。56天間歇性低氧組：變化不明顯，其OD值為0.1229±0.0046（與對照組相比P>0.05）。56天間歇性低氧加急性低氧組：BAX表達(dá)逐漸增多，其OD值為0.2629±0.00

5、29。（與對照組相比P<0.01）56天急性低氧組：BAX表達(dá)明顯增多，陽性細(xì)胞布視野，其OD值為0.3449±0.0047。（與對照組相比P<0.01）。42天、28天變化趨勢與56天相同。
　　 BAX蛋白免疫陽性表達(dá)在對照組、間歇性低氧組和急性低氧組中三個時間段之間無差異性（P>0.05）。在間歇性低氧加急性低氧組中，28天組：陽性表達(dá)較明顯，其OD值為0.2020±0.0017；42天組：免疫反應(yīng)產(chǎn)物增多，其OD值為0.

6、2617±0.0058（與對照組相比P<0.01）；56天組：OD值為0.2629±0.0029（與對照組相比P<0.01）。其中，42天組與56天組之間變化不明顯（P>0.05）。
　　 2.2 C-FOS：免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物呈棕黃色，位于細(xì)胞核內(nèi)，胞漿空白。28天對照組：其大腦頂葉皮質(zhì)中陽性細(xì)胞較少見，其陽性細(xì)胞率為38.34±0.20。28天間歇性低氧組：變化不明顯，其陽性細(xì)胞率為38.32±0.23（與對照組相比P>0.0

7、5）。28天間歇性低氧加急性低氧組：免疫陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增多，其陽性細(xì)胞率為47.43±0.30（與對照組相比P<0.01）28天急性低氧組：免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，呈強(qiáng)陽性表達(dá)。與對照組陽性細(xì)胞數(shù)相比有顯著差異，其陽性細(xì)胞率為80.27±0.28（與對照組相比P<0.01）。42天、56天變化趨勢與28天相同。
　　 C-FOS蛋白免疫陽性表達(dá)在對照組、間歇性低氧組和急性低氧組中三個時間段之間無差異性（P>0.05）。在間歇性低

8、氧加急性低氧組中，28天組：胞核內(nèi)顆粒狀免疫反應(yīng)產(chǎn)物表達(dá)較明顯，其陽性細(xì)胞率為47.43±0.30。42天組：免疫陽性細(xì)胞數(shù)增多，陽性強(qiáng)度增強(qiáng)，其陽性細(xì)胞率為54.39±0.28（與28天組相比P<0.01）。56天組：陽性細(xì)胞率為54.45±0.30（與28天組相比P<0.01）；但與42天組相比，差異不明顯（與42天組相比P>0.05）。
　　 3.超微結(jié)構(gòu)的變化
　　 對照組與間歇性低氧組之間無明顯差異性。給予急性

9、低氧后，神經(jīng)元變性明顯，核固縮，核膜皺折，常染色質(zhì)減少，出現(xiàn)核膜下邊集現(xiàn)象；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張、水腫、脫顆粒；線粒體腫脹，嵴斷裂、溶解、消失。突觸結(jié)構(gòu)遭到破壞，突觸小泡較少、破裂甚至融合，嵴減少消失呈空泡狀，突觸間隙模糊，前后膜不明顯。給予間歇性低氧加急性低氧后，神經(jīng)細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體輕度擴(kuò)張；線粒體腫脹，嵴模糊紊亂。突觸前成分內(nèi)的突觸小泡積聚，且大多位于周邊。突觸前后膜變薄，突觸間隙變窄，線粒體膨脹。與急性低氧組相比，給予間