解除EBV-TK基因沉默的初步探討.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文解除EBVTK基因沉默的初步探討姓名：潘藜婷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：杜軍20070501解除EBV11[基因沉默的初步探討蛋白TK不同濃度的NaB與B958細(xì)胞共同孵育36h后，檢測(cè)細(xì)胞的EB病毒是否進(jìn)入裂解期，并且表達(dá)裂解期蛋白TK，用Westemblot檢測(cè)TK蛋白的表達(dá)變化。2GCV對(duì)B958細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用聯(lián)合應(yīng)用NaB和GCV對(duì)B958細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用通過(guò)培養(yǎng)B958細(xì)胞，聯(lián)合應(yīng)用NaB

2、和GCv共同孵育細(xì)胞，B958細(xì)胞首先與NaB共孵育誘導(dǎo)24小時(shí)，讓TK表達(dá)，再與GCV共孵育，連續(xù)培養(yǎng)6天。設(shè)置對(duì)照組，觀察其效應(yīng)，是否有加強(qiáng)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的效應(yīng)，使用MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率。4探討解除B958細(xì)胞EBVTK基因沉默的機(jī)制往B958細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcMVMEKKI、pCMVRafS621A、pCMVRasNl7、Aktldn，12小時(shí)后與濃度為2mmol的NaB共培養(yǎng)，誘導(dǎo)24小時(shí)后，再與濃度為100ug／mlGCV，連

3、續(xù)培養(yǎng)3天或6天。設(shè)置對(duì)照組。3天或6天后MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率的改變。另外，B95—8細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時(shí)后，Westernblot檢測(cè)TK蛋白表達(dá)情況，設(shè)計(jì)陰性和陽(yáng)性對(duì)照組。結(jié)果：1NaB對(duì)B95—8細(xì)胞EBVTK的激活作用呈一定的濃度依賴性，在NaB濃度為2mmol／L時(shí)能誘導(dǎo)B958細(xì)胞EBV進(jìn)入裂解期，激活EBVTK的表達(dá)。通過(guò)NaB對(duì)B958細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)36小時(shí)，Westernblot檢測(cè)到可見(jiàn)的TK表達(dá)增高。2B958細(xì)胞與

4、不同濃度的OCV進(jìn)行共孵育，單獨(dú)的GCV對(duì)B958細(xì)胞的殺傷作用不理想。GCV對(duì)B958細(xì)胞的殺傷作用呈一定的濃度依賴性，低濃度對(duì)B95—8細(xì)胞的殺傷作用并不明顯，當(dāng)達(dá)到100pg／ml時(shí)，對(duì)B95—8細(xì)胞的殺傷作用才開(kāi)始顯現(xiàn)。B958細(xì)胞與不同濃度的CCV共培育6天后，MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，當(dāng)GCV濃度為100Hg／ml時(shí)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制為27r3％、200pg／ml為29，0％、400pg／ml為383％。3聯(lián)合應(yīng)用NaB和GCV與B9