致瀉性大腸桿菌檢測基因芯片的研制.pdf

1、致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉疾病嚴(yán)重危害人類健康。為了預(yù)防致瀉性大腸桿菌的感染，快速而準(zhǔn)確地檢測致瀉性大腸桿菌是關(guān)鍵的技術(shù)基礎(chǔ)之一。
　　 基因芯片是一種可以對(duì)核酸分子進(jìn)行平行和高通量檢測的技術(shù)，本文以食品中常見的四種致瀉性大腸桿菌和危害嚴(yán)重的大腸桿菌O157為檢測對(duì)象研制了病原菌檢測用基因芯片。本文通過對(duì)毒力基因和表面抗原基因簇的分析，確定用于致瀉性大腸桿菌檢測的靶基因基因；用Oligoarray軟件分別設(shè)計(jì)出特異探針，同時(shí)設(shè)計(jì)了

2、所有通用探針和陰性對(duì)照探針，將探針加尾后固定在載玻片上，制成寡核苷酸芯片；提取大腸柑橘年基因組DNA后采用多重PCR的方法進(jìn)行擴(kuò)增，純化擴(kuò)增產(chǎn)物去除引物，用下游引物進(jìn)行單鏈多重PCR，同時(shí)摻入Cy3_dUTP標(biāo)記反義鏈，熒光標(biāo)記后的產(chǎn)物和寡核苷酸芯片上的探針雜交，洗滌后用熒光掃描儀檢測雜交信號(hào)。
　　 總計(jì)用176株菌進(jìn)行了芯片性能評(píng)價(jià)，篩選得到了24條特異檢測。完成了芯片的特異性、靈敏度、雜菌干擾試驗(yàn)和模擬樣品試驗(yàn)，同時(shí)做了1