體外抑制腫瘤JAK-STAT通路探討STAT1和STAT4對腫瘤免疫的影響.pdf

1、目的；探討腫瘤細胞中STAT1和STAT4的表達對T細胞活化的作用。通過對腫瘤細胞中STAT1和STAT4的表達進行干預(yù)，檢測CD4+CD25+Treg細胞的被引導(dǎo)情況，并進一步觀察在此過程中腫瘤細胞分泌的細胞因子TGF-β2和IL-10mRNA表達對引導(dǎo)結(jié)果的影響。 方法 1、選取兩個STAT1和STAT4的表達活躍的小鼠腫瘤細胞系：Mosec(MouseOvarianSurfaceEpithelialCell，小鼠卵

2、巢上皮癌細胞)和Tc-1細胞系(TissueCulturenumberone，小鼠肺上皮癌細胞)，采用兩種不同的方法：(1)氟達拉濱(Fludarabine，STAT1特異性抑制劑)藥物治療和(2)RNA干擾技術(shù)，對STAT1和STAT4的表達予以干預(yù)。 2、用免疫組化的方法觀察藥物治療和RNA干擾技術(shù)處理前后細胞系的STAT1和STAT4的蛋白表達差異，并采用半定量RT-PCR的方法檢測藥物治療和RNA干擾技術(shù)處理前后細胞系的

3、STAT1和STAT4的mRNA表達量的不同，以明確干預(yù)方法的有效性。 3、將STAT1和STAT4蛋白被抑制的腫瘤細胞及其上清液分別與小鼠新鮮脾細胞共培養(yǎng)，通過流式細胞儀檢測共培養(yǎng)后T細胞中CD4+CD25+Treg細胞的比例。 4、用半定量RT-PCR的方法檢測被抑制STAT1和STAT4的細胞的TGF-β2和IL-10的mRNA表達水平。 結(jié)果 1、免疫組化和RT-PCR結(jié)果顯示采用fludarab

4、ine藥物治療和RNA干擾的方法能夠成功的降低細胞STAT1和STAT4的蛋白表達和mRNA表達； 2、流式細胞儀計數(shù)結(jié)果顯示： (1)腫瘤細胞上清液與脾細胞共培養(yǎng)，抑制腫瘤細胞STAT1后與對照組比較T細胞中CD4+CD25+Treg細胞的比例無明顯變化；抑制腫瘤細胞STAT4后與對照組比較CD4+CD25+Treg細胞在T細胞中的比例呈2倍明顯增高； (2)腫瘤細胞與脾細胞共培養(yǎng)，抑制STAT1和STAT4與

5、對照組相比無顯著變化。 3、RT-PCR方法檢測細胞因子的mRNA表達結(jié)果顯示： (1)腫瘤細胞不表達或微表達IL-10，抑制STAT4后細胞IL-10表達明顯增加，抑制STAT1后細胞仍不表達或微表達IL-10； (2)腫瘤細胞表達TGF-β2，抑制STAT4后細胞TGF-β2表達無明顯變化。 結(jié)論；與對照組相比，干預(yù)STAT4后的腫瘤細胞通過上清液作用可引導(dǎo)CD4+CD25+Treg細胞比例明顯增加。