家兔脂肪肝與動(dòng)脈硬化的關(guān)系及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、脂肪肝與動(dòng)脈粥樣硬化（As）關(guān)系密切，多個(gè)臨床病理研究顯示脂肪肝與心血管疾?。–VD）危險(xiǎn)性增加密切相關(guān)，脂肪肝可能不僅僅是As的指標(biāo)，還可能是As的早期調(diào)節(jié)因子。然而現(xiàn)有資料多為比較簡(jiǎn)單的臨床研究，相對(duì)深入的研究結(jié)果鮮見(jiàn)報(bào)道。為此，本文通過(guò)建立動(dòng)物模型，從病理學(xué)角度并利用分子生物學(xué)技術(shù)探討脂肪肝與動(dòng)脈硬化的關(guān)系及其可能機(jī)制。 第一部分：高脂飲食家兔脂肪性肝炎并動(dòng)脈粥樣硬化模型的復(fù)制 目的：建立高脂飲食誘導(dǎo)的新西蘭大白兔

2、脂肪性肝炎（NASH）合并As模型。 方法：14只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為正常對(duì)照組（n=6）和高脂飲食組（n=8）。正常對(duì)照組基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，高脂飲食組喂以高脂飼料誘導(dǎo)As。實(shí)驗(yàn)10周末處死所有動(dòng)物，測(cè)定空腹血清轉(zhuǎn)氨酶、血脂、血糖，對(duì)升主動(dòng)脈和肝臟進(jìn)行肉眼及光鏡組織學(xué)檢查，并測(cè)量升主動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜厚度。 結(jié)果:與正常對(duì)照組相比，高脂飲食組血清轉(zhuǎn)氨酶、血脂及血糖水平均顯著升高（P<0.05）；病理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，高脂飲食組升主動(dòng)

3、脈內(nèi)膜/中膜比值顯著高于正常對(duì)照組（1.13±0.32 vs 0.12±0.04，P<0.05），同時(shí)合并顯著的肝細(xì)胞脂肪變，且肝臟炎癥反應(yīng)程度明顯（P<0.01，vs 對(duì)照組）。 結(jié)論:高脂飲食誘導(dǎo)家兔As形成的同時(shí)也誘發(fā)NASH。 第二部分：脂肪肝與動(dòng)脈硬化的關(guān)系及其機(jī)制探討 目的:探討脂肪肝與As的關(guān)系及其可能的作用機(jī)制。 方法:化學(xué)比色法檢測(cè)肝組織勻漿超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、

4、丙二醛（MDA）；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)動(dòng)脈組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、血管細(xì)胞粘附分子-1（VCAM-1）mRNA的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清C反應(yīng)蛋白（CRP）。 結(jié)果:高脂飲食組肝臟勻漿SOD活力、GSH含量較正常對(duì)照組顯著降低，MDA含量則顯著升高（P<0.01）；血清CRP水平及動(dòng)脈組織VCAM-1 mRNA表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組（P<0.05），而MCP-1 mRNA表達(dá)

5、在兩組之間則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。相關(guān)性分析顯示，肝臟脂肪變程度、炎癥活動(dòng)度、肝勻漿MDA含量、血清CRP水平與動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（IMT）均具有正相關(guān)性（r分別為0.784、0.850、0.722、0.454，P<0.05），肝勻漿SOD活力及GSH含量與動(dòng)脈IMT則呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.819、-0.604，P<0.05）。 結(jié)論:脂肪肝與As關(guān)系密切。脂肪肝可能有助于As的發(fā)生和發(fā)展，發(fā)病機(jī)制涉及肝臟氧化應(yīng)激水平的改變以及CRP等炎

6、癥因子的產(chǎn)生和釋放增多。 第三部分：四氯化碳中毒家兔脂肪性肝硬化對(duì)動(dòng)脈硬化的影響 目的:觀察四氯化碳（CCl4）中毒新西蘭大白兔脂肪性肝硬化對(duì)As的影響。 方法:40只雄性新西蘭大白兔分為正常對(duì)照組（n=6）、高脂飲食誘導(dǎo)肝硬化，高脂飲食誘導(dǎo)As，10周末處死。比較空腹血清轉(zhuǎn)氨酶、血脂、血糖，HE染色、Masson染色觀察肝臟和升主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化。肝組織勻漿SOD、GSH、MDA水平，動(dòng)脈組織VCAM-1mRNA

7、表達(dá)，血清CRP檢測(cè)方法同第二部分。同時(shí)免疫組化染色檢測(cè)動(dòng)脈VCAM-1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:高脂飲食組和復(fù)合模型組動(dòng)物均成功復(fù)制動(dòng)脈硬化和脂肪性肝硬化模型。與正常對(duì)照組相比，CCl組血脂及ALT水平顯著升高（P<0.05），伴明顯的肝臟脂肪變、炎癥及纖維化，而動(dòng)脈內(nèi)膜/中膜比值及IMT、血清CRP、動(dòng)脈VCAM-1 mRNA 及蛋白表達(dá)均無(wú)顯著改變。與正常對(duì)照組相比，高脂飲食組和復(fù)合模型組動(dòng)物血清轉(zhuǎn)氨酶、血脂及血糖水平均顯著升高

8、（P<0.05），肝臟脂肪變、炎癥及纖維化程度明顯，并且動(dòng)脈內(nèi)膜/中膜比值及IMT顯著增加，血清CRP、動(dòng)脈VCAM-1 mRNA及蛋白表達(dá)也顯著升高。復(fù)合模型組與高脂飲食組之間轉(zhuǎn)氨酶水平和纖維化程度有明顯差異（P<0.05），內(nèi)膜/中膜比值也有顯著差異（P<0.01），而IMT差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)分析顯示肝纖維化評(píng)分與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清CRP水平、動(dòng)脈IMT的相關(guān)性均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論:單純CCl組（n=8）、CCl4組（n=