中國(guó)蜂膠酚類成分及膠源植物的研究.pdf

1、蜂膠(propolis)是蜜蜂(Apis mellifera)從植物嫩芽和枝干的表面或傷口處采集的樹脂，再混合蜂蠟、花粉及自身分泌物質(zhì)等物質(zhì)，最終形成地一種具有樹脂芬香味的粘性物質(zhì)。蜂膠具有抗菌消炎、抗氧化、抗腫瘤、抗糖尿病等生物活性，這些活性與蜂膠的化學(xué)成分密切相關(guān)。蜂膠的化學(xué)成分復(fù)雜，蜜蜂在不同氣候條件下采集不同植物的樹脂，因此來自不同地區(qū)蜂膠中的化學(xué)成分存在差異，進(jìn)而導(dǎo)致蜂膠生物活性的不同。中國(guó)作為世界蜂膠最重要的產(chǎn)地之一，產(chǎn)自中

2、國(guó)的蜂膠的化學(xué)成分和生物活性已被廣泛地研究。目前普遍認(rèn)為中國(guó)蜂膠的化學(xué)成分以酚類成分為主，蜂膠的植物來源是楊屬植物;但關(guān)于中國(guó)蜂膠中酚類成分組成的報(bào)道不近相同，此外中國(guó)膠源植物的研究也很少。因此，本論文對(duì)中國(guó)蜂膠中的酚類成分進(jìn)行了詳細(xì)地定性和定量分析，建立了中國(guó)蜂膠HPLC指紋圖譜;此外分別通過酚類成分分析和工蜂采集蜂膠行為觀察確定了中國(guó)蜂膠的膠源植物;最后研究了膠源植物樹脂在不同生長(zhǎng)季節(jié)的中酚類成分的變化。
　　1.全國(guó)25個(gè)省

3、市自治區(qū)隨機(jī)采集108個(gè)蜂膠毛膠樣品，運(yùn)用超聲波輔助75％乙醇對(duì)蜂膠中酚類成分進(jìn)行提取，通過HPLC-DAD、LC-MS及標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定性分析，確定了中國(guó)蜂膠中的47種酚類成分。此外通過標(biāo)品外標(biāo)法對(duì)蜂膠中29種酚類成分進(jìn)行定量分析，得到中國(guó)蜂膠中酚類成分的組成特征。運(yùn)用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件計(jì)算得到了中國(guó)蜂膠的HPLC指紋圖譜。
　　2.采集楊屬中毛白楊（Populus tomentosa Carr）、鉆天楊（Popul

4、us nigra varitalica）、河北楊（Populus hopeiensis Huet Chow）、小葉楊（Populus simonii Carr）、加拿大楊（Populus canadensis Moench、青楊（Populus cathayana）、歐洲黑楊（Populus nigraL.）和中華紅葉楊（Populus deftadides）共8種楊樹樹芽，松科中白皮松（Pinus bungeanaZucc.）、華山松

5、（Pinus armandii Franch、）、美人松（Pinus sylvestris var.sylvestriformis、）、油松（Pinus tabulaeformis Carr.）及雪松（Cedrus）分泌的樹脂，及柳屬中楊柳（Salixbabylonica）和樺屬中樺樹（Betula）的樹芽。采用超聲波輔助75％乙醇提取以上各種樹芽及樹脂中的酚類成分，通過HPLC-DAD得到相應(yīng)的HPLC圖譜，與中國(guó)蜂膠的指紋圖譜進(jìn)行比

6、較分析。發(fā)現(xiàn)來自楊屬黑楊派中歐洲黑楊與美洲黑楊的雜交品種——加拿大楊樹樹脂提取物的HPLC圖譜與中國(guó)蜂膠的指紋圖譜的相似度最高(0.814)，無論在酚類成分種類還是各成分含量上都較其他植物樹脂吻合。因此目前研究表明中國(guó)蜂膠的膠源植物，是來自歐洲黑楊及其雜交品種，加拿大楊。
　　3.工蜂采集蜂膠行為的觀察是研究蜂膠膠源植物的直接方式。本實(shí)驗(yàn)于2013年6-9月通過對(duì)飼養(yǎng)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所內(nèi)（北京，香山）的6箱蜜蜂進(jìn)行觀察，發(fā)

7、現(xiàn)工蜂僅采集加拿大楊樹芽分泌的樹脂（簡(jiǎn)稱加楊芽脂）作為其蜂膠的植物來源。同時(shí)觀察到，蜜蜂的采膠行為一般發(fā)生在雨后次日。分別對(duì)加楊芽脂、采膠工蜂后足攜帶的樹脂和蜂箱中刮取的蜂膠的75％乙醇提取物中的酚類成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)加楊芽脂與工蜂后足樹脂的相似度是0.977，加楊芽脂與蜂膠是0.896，蜂膠與工蜂后足樹脂是0.911，三者之間的相似度非常高;此外加楊芽脂、工蜂后足攜帶的樹脂和蜂箱中的蜂膠在物理性質(zhì)上的差異也很小。因此，從工蜂采膠行為觀

8、察法得到中國(guó)蜂膠的膠源植物是加拿大楊。
　　4.為研究加拿大楊分泌樹脂中酚類成分的變化，于2012年11月-2013年10月，每月中旬采集加拿大楊樹芽分泌的樹脂（簡(jiǎn)稱加楊芽脂），并用HPLC-DAD對(duì)其75％乙醇提取物中的物質(zhì)進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)加楊芽脂的化學(xué)成分雖然會(huì)隨分泌時(shí)間的不同而變化，但在6月-8月間的變化最小，此時(shí)加楊芽脂提取物的HPLC圖譜與中國(guó)蜂膠的指紋圖譜最為相似，分別為0.897，0.912和0.857。意大利蜜蜂在3