健脾化瘀方對(duì)缺氧誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株生物學(xué)影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討健脾化瘀方對(duì)缺氧誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480生物學(xué)行為的影響，從腫瘤微環(huán)境角度進(jìn)一步闡明健脾化瘀方抑制結(jié)腸癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制，為中藥復(fù)方治療腫瘤提供一些理論支持。
　　方法：
　　采用四甲基偶氮唑藍(lán)法（MTT法）檢測(cè)缺氧對(duì)照組和不同濃度的健脾化瘀方對(duì)缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞SW480細(xì)胞株增殖能力的影響;采用基質(zhì)-細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)觀察缺氧對(duì)照組和不同濃度的健脾化瘀方對(duì)缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞SW480細(xì)胞株黏附能

2、力的影響;采用細(xì)胞黏附人工重組基底膜培養(yǎng)小室法（Transwell小室）比較缺氧組和健脾化瘀方對(duì)缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞SW480侵襲能力的影響;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(realtime PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Bolt)檢測(cè)健脾化瘀方對(duì)缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞SW480細(xì)胞株上皮細(xì)胞-間質(zhì)化(EMT)相關(guān)基因(HIF-1α蛋白、轉(zhuǎn)錄因子Snail、E-鈣黏蛋白(epithelial-cadherin，E-cadherin)、

3、波形蛋白(Vimentin)表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1、使用不同濃度的CoCl2誘導(dǎo)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株缺氧后細(xì)胞增殖能力逐漸減弱，各濃度抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05):高濃度的健脾化瘀方對(duì)缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞有明顯抑制其增殖能力的作用，較中低劑量的給藥濃度差異明顯，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞較空白組黏附能力明顯增強(qiáng);不同濃度的健脾化瘀方作用

4、于缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后，細(xì)胞黏附能力明顯下降，并且呈現(xiàn)時(shí)間依賴(lài)性。
　　3、缺氧誘導(dǎo)的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞侵襲能力較空白組明顯增強(qiáng);不同濃度的健脾化瘀方在對(duì)缺氧誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480給藥24h后發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，能顯著抑制SW480細(xì)胞的侵襲能力，當(dāng)濃度達(dá)到0.4mg/ml以及0.8mg/ml時(shí)，倒置顯微鏡下顯示穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組明顯稀少，且呈濃度依賴(lài)關(guān)系。
　　4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法以及蛋白質(zhì)

5、印跡法實(shí)驗(yàn)顯示:與缺氧對(duì)照組相比，缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)、波形蛋白(Vimentin)及轉(zhuǎn)錄因子Snail mRNA和蛋白在結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中的表達(dá)隨著健脾化瘀方濃度的升高而逐漸降低;E-鈣黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白在結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中的表達(dá)隨著健脾化瘀方濃度的升高而逐漸增加。
　　結(jié)論：
　　1、CoCl2化學(xué)模擬缺氧微環(huán)境下的結(jié)腸癌細(xì)胞SW480細(xì)胞增殖能力明顯下降;不同濃度的健脾化瘀方對(duì)

6、缺氧微環(huán)境下的結(jié)腸癌細(xì)胞增殖抑制能力有一定增強(qiáng)作用，其對(duì)濃度有一定依賴(lài)性。
　　2、缺氧微環(huán)境下結(jié)腸癌細(xì)胞SW480細(xì)胞黏附及侵襲能力明顯增強(qiáng)，不同濃度的健脾化瘀方作用于缺氧微環(huán)境下的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后黏附及侵襲能力下降，且隨著時(shí)間的推移逐漸減弱。
　　3、健脾化瘀方抑制缺氧微環(huán)境下結(jié)腸癌SW480細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制可能與逆轉(zhuǎn)上皮細(xì)胞-間質(zhì)化轉(zhuǎn)變有關(guān):下調(diào)HIF-1α、Vimentin及轉(zhuǎn)錄因子Snail基因和蛋白的