SDF-1α對大鼠骨髓源性內皮祖細胞部分生物學活性的影響.pdf

1、本文分兩部分論述了SDF-1α對大鼠骨髓源性內皮祖細胞部分生物學活性的影響。 第一部分：大鼠骨髓源CD133+/VEGFR-2+/CD34+EPCs的分離、純化與鑒定 目的：本研究采用一種雜交瘤皿，根據內皮祖細胞集落形成單位（endothelial progenitor cells colony-forming units，EPCs-CFUs）的形態(tài)特征和EPCs表面特異性標記物分離EPCs。 方法：取大鼠股骨、

2、脛骨骨髓，將全骨髓接種在聚苯乙烯材料的雜交瘤皿上，培養(yǎng)4-7天后出現干細胞集落單位（stem cells colony-forming units），在顯微鏡下將這些集落分別挑選出來后，取單個集落的一部分細胞，免疫熒光鑒定EPCs表面特異性標記物CD133/VEGFR-2。CD133/VEGFR-2雙陽性即為EPCs-CFU。另一部分繼續(xù)傳代增殖，流式細胞術鑒定CD133/VEGFR-2/CD34。并把此方法定義為微孔法。 結果

3、：全骨髓接種后第4天，顯微鏡下可見明顯的CFUs。免疫熒光鑒定7.33±2.51％(n=5) 的CFUs為CD133+/VEGFR-2+ EPCs-CFUs，進一步傳代培養(yǎng)，流式細胞術鑒定CD133/VEGFR-2雙陽性率為73.28±7.43％, CD34/CD133雙陽性率為70.36±10.17％ (n=3)。傳代細胞可在體外形成血管樣結構，并分化出內皮細胞特異性標記物vWF。 結論：通過微孔法成功地從大鼠骨髓分離到內皮祖

4、細胞。 第二部分：SDF-1α對CD133+/VEGFR-2+/CD34+ EPCs增殖、遷移、黏附、血管樣結構形成及凋亡的影響。 目的：觀察基質細胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α，SDF-1α)對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓源性內皮祖細胞(EPCs)增殖、遷移、黏附、細胞集落單位生長及血管樣結構形成等生物學活性的影響，并初步探討其作用機制。 方法：微孔法從大鼠骨髓提取CD13

5、3+/VEGFR-2+/CD34+ EPCs。不同濃度SDF-1α處理EPCs后，采用MTT、transwell遷移系統(tǒng)、黏附實驗、細胞克隆實驗等檢測EPCs細胞增殖、遷移、黏附、細胞克隆生長以及血管樣結構形成；采用氧化低密度脂蛋白誘導EPCs凋亡，Hoechst 33258染色和流式細胞術檢測SDF-1α對EPCs凋亡率的影響。RT-PCR和Western blot檢測CXCR4 mRNA和蛋白表達水平。 結果： SDF-1α

6、濃度依賴性促進EPCs增殖、遷移和黏附、顯著增強EPCs克隆形成和血管樣結構形成，對照組與SDF-α各處理組比較差異均具顯著性（n=3，P＜0.05或P＜0.01）。SDF-1α顯著降低EPCs凋亡率，使凋亡率由Ox-LDL處理組的22.1±1.80％下降到Ox-LDL與SDF-1α共處理組的13.37±1.464％（n=3，P＜0.01）。SDF-1α濃度依賴性上調CXCR4 mRNA和蛋白表達，其中100μg/L SDF-1α處理組