FoxO1調(diào)節(jié)SREBP-1c啟動子轉(zhuǎn)錄活性的初步探討和PKCζ在胰島素誘導(dǎo)GLUT4轉(zhuǎn)位中的功能研究.pdf

1、SREBP-1c是一種調(diào)控脂質(zhì)合成的轉(zhuǎn)錄因子，在肝臟中，主要調(diào)節(jié)脂肪酸和甘油三脂的合成以及葡萄糖代謝，是胰島素和葡萄糖調(diào)節(jié)脂肪合成信號途徑中的一個介導(dǎo)分子，可能涉及胰島素抵抗、脂肪肝等。SREBP-1c的表達(dá)主要受轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)，胰島素和LXRα可激活它的轉(zhuǎn)錄。FoxO1，一種受胰島素磷酸化抑制調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄因子，在肝臟的葡萄糖代謝中發(fā)揮著重要的作用。通過雙熒光報告系統(tǒng)實驗，F(xiàn)oxO1能抑制基礎(chǔ)的SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄。通過啟動子區(qū)5’端刪

2、除實驗，F(xiàn)oxO1抑制SREBP-1c啟動子-500和-250分別是3倍和2.6倍，而在-148bp，抑制活性明顯下降僅為1.7倍，而-250和-148bp間恰好是LXRE元件。進(jìn)一步實驗表明，F(xiàn)oxO1抑制了LXRα和它的配體激活劑tO901317對SREBP-1c啟動子的轉(zhuǎn)錄激活，同時，F(xiàn)oxO1也抑制了LXRE的轉(zhuǎn)錄活性。另外，F(xiàn)oxO1抑制LXRα介導(dǎo)的SREBP-1c轉(zhuǎn)錄活性且呈劑量依賴性。有意思的是，當(dāng)將SREBP-1c啟動

3、子-500缺失LXRE后，F(xiàn)oxO1仍有抑制效應(yīng)。另外，F(xiàn)oxO1也抑制了RXRα或PGC-1α協(xié)同LXRα促進(jìn)SREBP-1c啟動子的活性。FoxO1A3H215R，一種不能結(jié)合DNA的突變體，同樣具有上述抑制效應(yīng)。染色質(zhì)免疫沉淀實驗，表明FoxO1抑制了LXRα結(jié)合到LXRE元件。進(jìn)一步的實驗表明，胰島素能拮抗FoxO1通過LXRα對SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄抑制。綜合以上的結(jié)果表明，F(xiàn)oxO1能通過抑制LXRα結(jié)合到LXRE元件，從而

4、抑制SREBP-1c啟動子的活性，但這或許不是唯一的抑制途徑，而胰島素能拮抗FoxO1的抑制效應(yīng)。 在胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運體4(GLUT4)從胞質(zhì)到細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運，繼而促進(jìn)葡萄糖的吸收中發(fā)揮著重要的作用。蛋白激酶C亞基ζ(PKCζ)已經(jīng)被暗示參與這一過程，但精確的機制仍不清楚。本研究中，我們在CHO-K1細(xì)胞中，探討了PKCζ對細(xì)胞骨架重塑以及GLUT4轉(zhuǎn)定位的影響。胰島素促進(jìn)了PKCcζ-Thr410的磷酸化水平，但卻并不影

5、響PKCζ的表達(dá)。同時，胰島素促進(jìn)了細(xì)胞骨架的改變和PKCζ和肌動蛋白actin的共定位，且這種效應(yīng)能被細(xì)胞骨架抑制劑(Latrunculin B)阻斷。過表達(dá)的PKCζ模仿了胰島素誘導(dǎo)的細(xì)胞骨架的改變和GLUT4的轉(zhuǎn)定位，這些效應(yīng)能被Latrunculin B完全阻斷。利用假底物(能完全阻斷PKCζ的作用)，也能完全阻斷胰島素和PKCζ對GUJT4轉(zhuǎn)定位效應(yīng)。我們的結(jié)果表明，PKCζ通過與細(xì)胞骨架肌動蛋白actin的相互作用介導(dǎo)了胰島