飽和脂肪酸導(dǎo)致骨骼肌胰島素抵抗及收縮促進(jìn)GLUT4轉(zhuǎn)位的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 探討飽和脂肪酸對骨骼肌細(xì)胞胰島素作用的影響及收縮促進(jìn)GLUT4轉(zhuǎn)位的機(jī)制。
　　 方法:
　　 第一部分用棕櫚酸孵育L6-GLUT4myc和C2C12-GLUT4myc骨骼肌細(xì)胞，酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immnosorbent assay，ELISA)測定棕櫚酸對骨骼肌細(xì)胞GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響。應(yīng)用免疫印跡法(Western blot)檢測棕櫚酸對Akt磷酸化的影響。

2、r>　　 第二部分在上述工作基礎(chǔ)上，Western blot檢測棕櫚酸對c-Jun N-末端激酶(JNK)、IRS1的磷酸化的影響和BIM(cPKC和nPKC的抑制劑)對棕櫚酸孵育后Akt的磷酸化影響并同時(shí)用ELISA法檢測對GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響。
　　 第三部分在上述基礎(chǔ)上電刺激(Electric Pulse Stimulation，EPS)C2C12-GLUT4myc骨骼肌細(xì)胞，測定電刺激對GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響

3、、并檢測Compound C(AMPK的抑制劑，CC)、STO-609（CaMKK的抑制劑）、KN93（CaMKⅡ的抑制劑）、CN21（CaMKⅡ的抑制肽）對電刺激調(diào)節(jié)GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分結(jié)果顯示:飽和脂肪酸降低了胰島素刺激的L6-GLUT4myc和C2C12-GLUT4myc肌管的GLUT4myc轉(zhuǎn)位和Akt的磷酸化。
　　 第二部分結(jié)果顯示:飽和脂肪酸并不影響JNK、IR

4、S1的磷酸化;PKC抑制劑BIM對飽和脂肪酸孵育后胰島素刺激的GLUT4myc轉(zhuǎn)位的降低沒有影響，即抑制PKC沒有緩解胰島素抵抗作用。
　　 第三部分結(jié)果顯示:電刺激增加了C2C12-GLUT4myc肌管的GLUT4myc轉(zhuǎn)位;Compound C、STO-609、KN93、CN21均抑制了電刺激增加的GLUT4myc轉(zhuǎn)位。
　　 結(jié)論:
　　 1.飽和脂肪酸造成L6-GLUT4myc和C2C12-GLUT4my