三氧化二砷經(jīng)ROS、NF-κB、Bcl-2及Bax途徑誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的信號傳導(dǎo)途徑研究.pdf

1、目的：探討三氧化二砷（arsenic trioxide, As2O3）對HL-60細(xì)胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）生成、NF-κB及其靶基因C-IAP2和bcl-2、bax表達(dá)的作用，同時觀察N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)對上述指標(biāo)變化的影響。
　　方法：7.5μmol/L As2O3單用及與500μmol/L NAC聯(lián)合分別作用于HL-60細(xì)胞12h和24h后，

2、流式細(xì)胞術(shù)檢測HL-60細(xì)胞ROS的產(chǎn)生量；Western blot法分別檢測核蛋白NF-κBp65、bcl-2和bax變化情況；RT-PCR法檢測bcl-2、bax以及NF-κB靶基因C-IAP2的表達(dá)；免疫組織化學(xué)法檢測bcl-2蛋白；瑞氏染色觀察不同濃度As2O3對正常人外周血淋巴細(xì)胞生長的影響。
　　結(jié)果：①7.5μmol/L的As2O3分別作用于HL-60細(xì)胞12h、24h后，細(xì)胞內(nèi)ROS的生成量增加，與對照組比較，有顯

3、著性差異（P＜0.05）；500μmol/L NAC和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60細(xì)胞12h、24h，細(xì)胞內(nèi)ROS的生成降低，與對應(yīng)的As2O3處理12h、24h組相比，有顯著性差異（P＜0.05）。②Western blot法檢測結(jié)果顯示：7.5μmol/L As2O3作用HL-60細(xì)胞12h、24h后，NF-κBp65蛋白相對表達(dá)量分別為(45.66±4.56)％和(27.68±2.36)%，bcl-2蛋白相對表

4、達(dá)量分別為(56.34±6.45)%和(42.01±3.01)%， bax蛋白相對表達(dá)量分別(50.65±4.50)%和(66.78±5.05)%，與對照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。③500μmol/L NAC和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60細(xì)胞12h、24h后，NF-κBp65蛋白相對表達(dá)量分別為(60.18±4.93)%和(45.35±4.27)%，與相應(yīng)的As2O312h、24h單獨處理組相比，有顯著性差

5、異（P＜0.05）；bcl-2蛋白相對表達(dá)量分別為(54.77±5.97)%和(41.71±4.13)%，bax蛋白相對表達(dá)量分別為(54.49±4.93)%和(66.70±5.10)%，與相應(yīng)的As2O312h、24h單獨處理組相比，均無顯著性差異（P＞0.05）；免疫組織化學(xué)法檢測bcl-2也顯示相同的結(jié)果。④7.5μmol/L As2O3作用HL-60細(xì)胞12h、24h， C-IAP2 mRNA相對表達(dá)值分別為(68.48±4.7

6、9)%和(55.21±3.92)%；bcl-2 mRNA相對表達(dá)值分別為(65.02±4.69)%和(40.70±3.94)%，bax mRNA相對表達(dá)值分別為(46.71±4.26)%和(95.65±5.57)%，與對照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。⑤500μmol/L NAC和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60細(xì)胞12h、24h后，C-IAP2 mRNA相對表達(dá)值分別為(82.86±6.16)%和(85.38±6

7、.78)%；分別與相應(yīng)的As2O312h、24h單獨處理組相比，有顯著性差異（P＜0.05）；bcl-2 mRNA相對表達(dá)值分別為(64.81±4.80)%和(37.21±3.42)%，bax mRNA相對表達(dá)值分別為(46.80±4.04)%和(94.41±5.71)%，與相應(yīng)的As2O312h、24h單獨處理組相比，無顯著性差異（P＞0.05）。⑥7.5μmol/L As2O3對正常人外周血淋巴細(xì)胞影響不大。
　　結(jié)論：①≤7