尼莫地平對阿糖胞苷誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡Fas-FasL及Caspase信號途徑的影響.pdf

1、目的：探討尼莫地平對阿糖胞苷誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡Fas/FasL及Caspase信號途徑的影響。
　　 方法：
　　 取對數(shù)生長期HL-60細(xì)胞,分為:對照組(未加任何藥物的HL-60細(xì)胞),NMDP(0.001g/L～0.100g/L)組,Ara-c(0.005g/L～0.500g/L)組,NMDP+Ara-c組,處理HL-60細(xì)胞24h。采用ATP化學(xué)發(fā)光法檢測細(xì)胞增殖抑制率,選取NMDP濃度為0.050g/L、A

2、ra-c濃度為0.010g/L為最適濃度,后分為:對照組(未加任何藥物的HL-60細(xì)胞),NMDP組(濃度為0.050g/L),Ara-c組(濃度為0.010g/L),NMDP(0.050g/L)+Ara-c(0.010g/L)組。吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)染色、熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài),且計數(shù)凋亡細(xì)胞,計算凋亡率。Westernblotting方法檢測細(xì)胞Fas及FasL蛋白的表達(dá)。Caspase3和Caspase8試劑盒檢測

3、Caspase3及Caspase8活性。
　　 結(jié)果：
　　 1.細(xì)胞增殖抑制率:①與對照組比較,不同濃度NMDP(0.001～0.100g/L)組及Ara-c(0.005～0.500g/L)組細(xì)胞增殖抑制率差異均有顯著性(FNMDP=12231.563,Fara-c=6404.210,p=0.000)。②當(dāng)NMDP濃度為0.050g/L、Ara-c濃度為0.010g/L時,細(xì)胞增殖抑制率最高,差異有極顯著性(F=916

4、.836,p=0.000)。
　　 2.細(xì)胞凋亡:①AO/EB染色:對照組細(xì)胞多呈均一綠色且細(xì)胞形態(tài)完整,NMDP組、Ara-c組及NMDP+Ara-c組均可見數(shù)量不等的核染色質(zhì)呈橘紅色、固縮狀晚期凋亡細(xì)胞,且以NMDP+Ara-c組最多。②細(xì)胞凋亡率:對照組凋亡率為(5.021±0.391)%,NMDP組、Ara-c組及NMDP+Ara-c組分別為(14.203±1.204)%,(27.604±3.192)%,(54.929±

5、11.598)%,均明顯高于對照組(F=148.020,p=0.000);Ara-C組凋亡率高于NMDP組(P＜0.05),但低于NMDP+Ara-c組。
　　 3.Fas蛋白表達(dá):對照組Fas蛋白表達(dá)灰度掃描比值為(0.642±0.008),NMDP組、Ara-c組與NMDP+Ara-c組分別為(0.677±0.003),(0.716±0.005),(0.939±0.003),與對照組相比,三組均有統(tǒng)計學(xué)差異(F=1890.5

6、69,p=0.000);Ara-c組Fas蛋白表達(dá)高于NMDP組(P=0.000),但低于NMDP+Ara-c組。
　　 4.FasL蛋白表達(dá)對照組FasL蛋白表達(dá)灰度掃描比值為(0.493±0.001),NMDP組、Ara-C組與NMDP+Ara-c組分別為(0.554±0.007),(0.605±0.001),(0.807±0.003),明顯高于對照組(F=16065.218,p=0.000),且三組間相比亦有統(tǒng)計學(xué)差異(P

7、=0.000),以NMDP+Ara-c組升高最顯著。
　　 5.Caspase3活性:對照組Caspase3活性為(116699.000±72834.647)RLU,NMDP組、Ara-c組及NMDP+Ara-c組分別為(234964.333±32328.981)RLU,(614644.333±15958.413)RLU,(815261.000±91330.007)RLU,與對照組相比,三組均有統(tǒng)計學(xué)差異(F=85.045,p=

8、0.000);Ara-c組Caspase3活性高于NMDP組(p＜0.05),但低于NMDP+Ara-c組。
　　 6.Caspase8活性:對照組Caspase8活性為(5890.500±1523.108)RLU,NMDP組、Ara-c組及NMDP+Ara-c組細(xì)胞分別為(16135.000±140.714)RLU,(39399.000±1786.859)RLU,(66113.000±823.779)RLU,明顯高于對照組(F

9、=923.843,p=0.000),Ara-c組Caspase8活性高于NMDP組(p＜0.05),而低于NMDP+Ara-c組。
　　 7.細(xì)胞凋亡與Fas/FasL蛋白表達(dá):①Fas蛋白表達(dá)與細(xì)胞凋亡:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.893,P=0.000,差別有顯著性,Fas蛋白表達(dá)與凋亡呈強正線性相關(guān)。②FasL蛋白表達(dá)與細(xì)胞凋亡:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.939,p=0.000,差別有顯著性,FasL蛋白表達(dá)與凋亡呈強正

10、線性相關(guān)。③Fas與FasL蛋白表達(dá):Pearson相關(guān)系數(shù)為0.992,p=0.000,差別有顯著性,Fas與FasL蛋白表達(dá)呈強正線性相關(guān)。
　　 8.細(xì)胞凋亡與Caspase活性:①Caspase3與細(xì)胞凋亡:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.967,P=0.000,差別有顯著性,Caspase3活性與凋亡呈強正線性相關(guān)。②Caspase8與細(xì)胞凋亡:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.981,p=0.000,差別有顯著性,Caspas

11、e8活性與凋亡呈強正線性相關(guān)。③Caspase3與Caspase8:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.960,p=0.000,差別有顯著性,Caspase3與Caspase8活性呈強正線性相關(guān)。
　　 9.Fas/FasL蛋白表達(dá)與Caspase活性:①Fas與Caspase3:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.865,p=0.000,差別有顯著性,Fas蛋白表達(dá)與Caspase3活性呈強正線性相關(guān)。②Fas與Caspase8:Pearso

12、n相關(guān)系數(shù)為0.942,P=0.000,差別有顯著性,Fas蛋白表達(dá)與Caspase8活性呈強正線性相關(guān)。③FasL與Caspase3:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.905,p=0.000,差別有顯著性,FasL蛋白表達(dá)與Caspase3活性呈強正線性相關(guān)。④FasL與CaspaseS:Pearson相關(guān)系數(shù)為0.971,P=0.000,差別有顯著性,FasL蛋白表達(dá)與Caspase8活性呈強正線性相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　

13、 1.尼莫地平能協(xié)同阿糖胞苷促進(jìn)HL-60細(xì)胞增殖抑制,NMDP(0.001～0.050g/L)及Ara-c(0.005～0.010g/L)范圍內(nèi)均呈濃度依賴性。當(dāng)NMDP濃度為0.050g/L、Ara-c濃度為0.010g/L時,細(xì)胞增殖抑制率最高。
　　 2.尼莫地平能協(xié)同阿糖胞苷增強HL-60細(xì)胞Fas和FasL蛋白表達(dá),Fas及FasL蛋白表達(dá)與細(xì)胞凋亡呈強正線性相關(guān),提示其凋亡機制可能與上調(diào)Fas與FasL蛋白表達(dá)有

14、關(guān)。
　　 3.尼莫地平能協(xié)同阿糖胞苷增強HL-60細(xì)胞Caspase3和Caspase8活性,Caspase3及Caspase8活性與細(xì)胞凋亡呈強正線性相關(guān),提示其凋亡機制可能與增強Caspase3及Caspase8活性有關(guān)。
　　 4、Fas及FasL蛋白表達(dá)與Caspase3及Caspase8活性亦呈強正線性相關(guān),提示Fas/FasL蛋白參與尼莫地平協(xié)同阿糖胞苷誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡可能是通過Caspase途徑完成