京尼平苷對兔膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過研究京尼平苷對體外培養(yǎng)兔膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞增殖、凋亡、TNF-a表達(dá)和培養(yǎng)細(xì)胞上清液中IL-1、TNF-α的含量的影響,探討京尼平苷對OA滑膜細(xì)胞的作用及機(jī)制,為臨床應(yīng)用中藥梔子治療OA提供理論指導(dǎo)。方法：采用改良Hulth法制備兔膝OA模型15只(前交叉韌帶、內(nèi)側(cè)副韌帶切斷+內(nèi)側(cè)半月板切除),根據(jù)形態(tài)學(xué)、影像學(xué)、生化指標(biāo)進(jìn)行模型鑒定。提取模型組滑膜細(xì)胞,原代培養(yǎng)、傳代,取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。A 組：不含京尼平苷(G

2、eniposide Gen)；B 組：20ug/ml Gen；C組：40ug/ml Gen；D組：60ug/ml Gen；E組：80ug/ml Gen。MTT比色法檢測京尼平苷對滑膜細(xì)胞增殖的影響；Western-blot檢測BCL-2及TNF-α蛋白的表達(dá)；ELISA法檢測滑膜細(xì)胞上清液、血清IL-1和TNF-α含量。結(jié)果：從形態(tài)學(xué)、影像學(xué)、生化指標(biāo)表明改良Hulth法成功構(gòu)建兔膝OA模型。關(guān)節(jié)液中IL-1含量：正常組 77.64±9

3、.37pg/ml；造模 4W175.52±18.7 pg/ml, 與對照組相比*P<0.05；造模8W363.42±54.11 pg/ml,與對照組相比*P<0.05。關(guān)節(jié)液中TNF-α含量：正常組49.99 ±5.28 pg/ml；造模4W143.38±48.34 pg/ml, 與對照組相比*P<0.05。造模8W280.72 ±42.24 pg/ml,與對照組相比*P<0.05。血清中IL-1含量：正常組10.66±1.04 pg/

4、ml；造模4W51.19±4.66 pg/ml ,P；造模8W96.83±9.48 pg/ml, P,血清中TNF-α含量：正常組：15.74±1.05 pg/ml；造模4W：25.22±2.43 pg/ml；造模8W：46.15±7.04 pg/ml。Gen 四個(gè)濃度(B、C、D、E)對滑膜細(xì)胞的抑制率分別為,各組 24 小時(shí)抑制率分別為：(5.65±3.5)%,(7.03±1.6)%,(6.03±1.5)%,(2.89±3.0)%；

5、48 小時(shí)抑制率分別為：(8.01±3.8)%,(8.32±2.3)%,(6.67±2.6)%,(3.47±3.7)%；72小時(shí)抑制率分別為：(3.29±2.3)%,(3.17±1.3)%,(2.27±2.3)%,(1.70 ±4.3)%。隨著Gen濃度的不斷增加,細(xì)胞抑制率增加,呈現(xiàn)明顯的濃度依賴關(guān)系,滑膜的抑制率高于對照組(P<0.05)。Gen 四個(gè)濃度(B、C、D、E)對滑膜細(xì)胞中BCL-2、TNF-α蛋白的表達(dá)分別為,各組BC

6、L-2蛋白表達(dá)分別為：(0.873±0.0084), (1.013±0.0017),(1.156±0.019),(1.311±0.021),(1.672±0.017)。與對照組相比隨著給藥濃度的增加 Bcl-2 蛋白的表達(dá)也在逐漸降低。與對照組相比*P<0.05。各組TNF-α蛋白表達(dá)：(0.698±0.046),(0.740±0. 044),(0.689± 0.021),(0.578±0.035),(0.576±0.026)。與對照組

7、相比隨著給藥濃度的增加TNF-α蛋白的表達(dá)也在逐漸降低。與對照組相比*P<0.05。Gen(A、B、C、D、E)組滑膜細(xì)胞上清液中IL-1水平分別為：52.026±8.41pg/ml；42.457±5.38 pg/ml；32.878 ±6.09 pg/ml；26.312±5.54 pg/ml；20.983±4.93 pg/ml,TNF-α水平分別為：10.253 ±1.45 pg/ml；91.299±15.01 pg/ml；85.311

8、±8.17 pg/ml；56.59±6.12 pg/ml；52.813 ±5.47 pg/ml；26.211±5.39pg/ml。與對照組相比有差異性(*p<0.05,**p<0.01)。結(jié)論：(1)改良Hulth法是制備兔膝OA的有效方法(2)京尼平苷可有效抑制兔膝OA滑膜細(xì)胞的增殖,促進(jìn)滑膜細(xì)胞凋亡；(3)京尼平苷有效下調(diào)滑膜細(xì)胞分泌 IL-1、TNF-α。(4)京尼平苷對OA的治療作用與抑制滑膜細(xì)胞的增殖,促進(jìn)滑膜細(xì)胞凋亡有關(guān)。(