防御素5與修飾GLP2多基因表達載體構建及對復合傷腸源性感染防治的.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文防御素5與修飾GLP2多基因表達載體構建及對復合傷腸源性感染防治的姓名：譚虎申請學位級別：碩士專業(yè)：@指導教師：楊天德20040501第三軍醫(yī)大學碩士論文 第 頁 結果1 通過 RT- PCR 方法 從癲癇患者的腦組織總 RNA 中獲得高血糖素原基因序列測序結果顯示序列完全正確2 通過 PCR 重組技術 獲得了 HD-5 的目的基因片段 測序結果顯示已成功將信號肽和成熟肽序列拼接起來 并加入了 Lox- P 序列

2、 GLP- 2 也得到了相同結果 而且編碼其成熟肽 N- 末端第二位氨基酸的序列已由丙氨酸(GCT)突變?yōu)楦拾彼?GGT)提示定點突變成功3 重組表達質粒 pVITRO3-HD5-GLP2 酶切分析提示插入片段方向正確 測序結果顯示序列完全正確 可用于下一步的基因治療實驗4 腸上皮細胞 Caco- 2 進行重組質粒脂質體轉染后RT- PCR 顯示陽性克隆中有HD- 5 和 GLP-2 mRNA 的表達 提示重組質粒轉染成功并得到成功轉

3、錄 MTT 證實含rGLP- 2 的培養(yǎng)上清可明顯促進 Caco- 2 細胞增殖5 殼聚糖形成的納米粒大小均勻 DNA 包封率高 能有效抵抗 DNA 酶 I 降解介導 pEGFP 基因轉移后 通過熒光顯微鏡能觀察到有綠色熒光蛋白產生 但表達量低于脂質體轉染對照組6 口服重組質粒殼聚糖納米粒后 RT- PCR 方法檢測到實驗小鼠腸上皮組織有HD- 5 和 GLP-2 mRNA 的表達 光學顯微鏡 掃描電鏡及電子顯微鏡均提示 重組質粒治療組

4、的腸上皮形態(tài)結構修復較對照組明顯提前 表現(xiàn)為絨毛高度增加 密度增加排列整齊 各細胞器損傷明顯減輕 移位細菌及內毒素檢測提示移位至淋巴結 肝血中的細菌明顯減少 血漿內毒素濃度明顯降低 而加用氯胺酮對該治療效應無明顯影響結論1 通過PCR重組技術可以成功地將編碼信號肽和成熟肽的序列拼接起來 適用于分泌性載體的構建2 雙順反子構建的多基因表達質?？沙晒y帶多個基因并能同時高效表達 適用于多基因表達策略3 殼聚糖納米?？捎糜诮浛诜緩降哪c道基因