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文檔簡介
1、目的: (1)研究多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者骨髓基質細胞(BMSCs)向成骨細胞(OB)分化及其RANKL和OPG表達; (2)研究唑來膦酸對MM OB增殖及其RANKL和OPG表達的影響。 方法: 取MM患者骨髓液3-5 m1密度梯度離心法分離單個核細胞層原代培養(yǎng)形成BMSCs,貼壁傳代后采用含有維生素C(50 mg/L),地塞米松(10-8mol/L),β-甘油磷酸鈉(10 mmol/L)的低糖DMEM
2、培養(yǎng)基將BMSCs誘導成OB,倒置相差顯微鏡觀察形態(tài)變化并用HE染色、瑞氏染色、堿性磷酸酶染色及VonKossa染色證實OB的存在;采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測并比較MM患者與對照組OB的RANKL和OPG mRNA表達水平。采用不同濃度唑來膦酸處理培養(yǎng)的OB,分別作用24 h、48 h和72 h后,通過 (1)細胞計數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測OB增殖; (2)RT-PCR檢測OB RANKL和OPG m
3、RNA表達:和 (3)酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測相應細胞培養(yǎng)上清液中sRANKL和OPG濃度來考察唑來膦酸的作用。 結果: (1)MM患者BMSCs在條件培養(yǎng)基中誘導分化,形成的細胞具備OB形態(tài)學特征,ALP染色陽性,能形成鈣結節(jié)。 (2)MM患者OB RANKLmRNA表達高于對照組,與GAPDH的灰度比分別是0.72±0.02和0.65±0.01(P<0.05);OPG mRNA表達低于對照組
4、,與GAPDH的灰度比分別是0.43±0.02和0.49±0.01(P<0.05)。 (3)OB用唑來膦酸處理后,唑來膦酸使OB的CCK-8實驗吸光值呈不同程度升高。 (4)唑來膦酸作用24 h和48 h后,OB RANKLmRNA表達變化不明顯。作用72 h,低濃度(10-9mol/L)唑來膦酸顯示能降低RANKL mRNA表達,與對照(0 mol/L)比較,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。OB培養(yǎng)上清的sRANKL
5、濃度也呈現(xiàn)類似的變化。 (5)唑來膦酸作用24 h后,OB OPG mRNA表達變化不明顯。作用48 h,呈不同程度增加,以10-8 mol/L濃度最明顯,與對照(0 mol/L)比較,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。作用72 h,呈不同程度增加,以10-7mol/L濃度最明顯,與對照(0 mol/L)比較,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 OB培養(yǎng)上清的OPG濃度也呈現(xiàn)類似的變化。 結論: 可以從M
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