BMSCs移植對家兔急性肺損傷的保護(hù)作用及hAng1真核表達(dá)載體合成與測序.pdf

1、設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn)：隨機(jī)對照動物實(shí)驗(yàn)，于2007-10/2008-01在唐都醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成。
　　目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對內(nèi)毒素誘發(fā)急性肺損傷模型兔的保護(hù)作用以及構(gòu)建人血管生成素1（human angiopoietin 1,hAng-1）真核表達(dá)載體pcDNA3.1+-hAng1，為下一步實(shí)驗(yàn)做好基礎(chǔ)。
　　方法：Ficoll法分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，傳至第3代備用。肺損傷模型組、細(xì)胞移植組兔通過向氣管內(nèi)滴注內(nèi)

2、毒素建立ALI/ARDS，造模成功30min后，細(xì)胞移植組經(jīng)右側(cè)頸靜脈注入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸浮液2mL(細(xì)胞數(shù)1×105)，鹽水對照組、肺損傷模型組同法給予等量生理鹽水。血管生成素1基因片段經(jīng)巢式聚合酶鏈反應(yīng)方法擴(kuò)增，血管生成素1基因片段及載體pcDNA3.1+分別經(jīng)HindⅢ和XhoⅠ雙酶切，之后經(jīng)T4連接酶連接，構(gòu)成pcDNA3.1+-hAng1。
　　結(jié)果：濕干比值升高提示肺水腫的存在，中性粒細(xì)胞數(shù)量增加提示較重的炎性反應(yīng)存

3、在，蛋白含量升高提示肺泡-毛細(xì)血管內(nèi)膜屏障受損。移植48h后與鹽水對照組比較，肺損傷模型組支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞數(shù)目、蛋白含量均明顯升高(P<0.01)，濕干比明顯升高(P<0.01)；與肺損傷模型組比較，細(xì)胞移植組支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞數(shù)目、蛋白含量均明顯降低(P<0.01)，濕干比明顯降低(P<0.01)。蘇木精-伊紅染色結(jié)果顯示，鹽水對照組肺泡組織結(jié)構(gòu)正常，肺損傷模型組肺組織出現(xiàn)典型的急性肺損傷改變，細(xì)胞移植組肺組織病理變