補(bǔ)肺通絡(luò)解毒法對肺癌治療作用及機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方(BTJ)是來自于臨床治療肺癌的有效驗(yàn)方，具有補(bǔ)肺益氣、祛痰化瘀、清熱解毒、通絡(luò)消瘤之功效。本課題以中醫(yī)“絡(luò)脈絡(luò)病”理論為指導(dǎo)，應(yīng)用多種現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)在整體、細(xì)胞、分子及基因水平上研究補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方抗Lewis肺癌及抗轉(zhuǎn)移作用，并深入探討其作用的分子機(jī)制，為抗腫瘤及抗轉(zhuǎn)移藥物的開發(fā)及其在臨床上的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 理論探討： 1、提出“肺虛絡(luò)痹毒結(jié)”是肺癌的基本病機(jī)。 ①臟氣虧虛是致病

2、之本：肺氣陰兩虛是貫穿肺癌始終的主要病機(jī)，脾腎虛衰是肺癌病機(jī)的最終歸宿。 ②絡(luò)痹毒結(jié)為致病之標(biāo)：痰瘀痹絡(luò)是肺癌發(fā)生的重要因素，癌毒結(jié)聚是肺癌發(fā)生的關(guān)鍵。 ③臟虛絡(luò)痹相互影響，互為因果。 2、根據(jù)病機(jī)，提出補(bǔ)臟通絡(luò)解毒是肺癌的基本治療法則。 ①補(bǔ)臟以治其本。補(bǔ)臟以氣血為先，以陰陽為本。 ②通絡(luò)解毒以治其標(biāo)。通絡(luò)是治療肺癌的重要環(huán)節(jié)，滌毒是治療肺癌的關(guān)鍵。 方法：以國際公認(rèn)的肺癌實(shí)驗(yàn)研究動物模

3、型—小鼠Lewis肺癌移植瘤模型作為體內(nèi)試驗(yàn)研究對象，在計算抑瘤率和病理學(xué)觀察的基礎(chǔ)上，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(ELISA)檢測瘤組織細(xì)胞周期蛋白cyclin D1、細(xì)胞核抗原(PCNA)，TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測法檢測瘤組織細(xì)胞凋亡，PCR-ELISA法檢測瘤組織端粒酶活性，免疫組織化學(xué)法檢測瘤組織微血管密度(MVD)，RT-PCR法檢測瘤組織CD44 mRNA表達(dá)，從而對不同劑量的補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方對小鼠Lewis肺癌的抑制作用及其

4、抗移植瘤自發(fā)性轉(zhuǎn)移作用進(jìn)行了系統(tǒng)研究。 結(jié)果： 1、補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方對小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及其機(jī)制研究： ①補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方低、中、高劑量組及環(huán)磷酰胺組瘤重與空白對照組相比均明顯降低(P<0.01)。中劑量組抑瘤率可達(dá)47.88％。在不同濃度組間比較，中劑量組的抑制作用顯著強(qiáng)于低劑量組(P<0.01)，但隨藥物濃度的進(jìn)一步增加，抑制作用反而顯著下降(P<0.01)。 ②瘤組織病理學(xué)：光鏡下，補(bǔ)肺

5、通絡(luò)解毒方各組均可見到不同程度的片狀壞死區(qū)，瘤組織及其周圍微血管減少，并可見到細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變：染色質(zhì)聚集、細(xì)胞核固縮、核碎裂及溶解等，以中劑量組最明顯。透射電鏡下，可見到藥物組腫瘤細(xì)胞線粒體明顯腫脹，溶酶體和脂質(zhì)小體增多，細(xì)胞核核仁消失、染色質(zhì)邊集于核膜下、染色質(zhì)濃縮。 ③補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方低、中、高劑量組均能明顯降低瘤組織細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1的表達(dá)(P<0.05)。中劑量組的抑制作用顯著強(qiáng)于低劑量組和環(huán)磷酰胺陽性藥

6、物對照組(P<0.01)。但隨藥物濃度的進(jìn)一步增加，抑制作用反而顯著下降(P<0.01)。 ④補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方低、中、高劑量組均能明顯降低瘤組織細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)。高、中劑量組的抑制作用顯著強(qiáng)于低劑量組(P<0.01)，但高、中劑量組抑制作用差異不明顯(P>0.05)。與環(huán)磷酰胺組相比，補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方各組作用略低(P<0.05)。 ⑤補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方低、中、高劑量組均能明顯提高瘤組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(P<0.01)。中

7、、高劑量組提高瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)作用強(qiáng)于環(huán)磷酰胺陽性對照組(P<0.05，P<0.01)． ⑥補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方低、中、高劑量組均能明顯降低瘤組織細(xì)胞端粒酶的活性(P<0.01)。補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方中劑量組對端粒酶活性的抑制作用顯著強(qiáng)于環(huán)磷酰胺陽性對照組(P<0.01)。 2.補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方抗小鼠Lewis 肺癌移植瘤自發(fā)性轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制研究： ①補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方低、中、高劑量組均能明顯降低瘤組織微血管密度(P<0.01)，

8、但未表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方中劑量組降低瘤組織微血管密度的作用顯著強(qiáng)于環(huán)磷酰胺陽性對照組(P<0.01)。 ②補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方中、高劑量組均能明顯降低瘤細(xì)胞CD44 mRNA表達(dá)量(P<0.01)，但未表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。與環(huán)磷酰胺組相比，補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方中、高劑量組作用略低(P<0.05)。 結(jié)論：補(bǔ)肺通絡(luò)解毒方具有顯著抑制小鼠Lewis肺癌及抗移植瘤自發(fā)性轉(zhuǎn)移作用；能顯著降低瘤細(xì)胞Cyclin D1、細(xì)胞核