高糖環(huán)境下血管生成素2在腎小球內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)及生物學(xué)作用.pdf

1、目的：通過體外不同條件培養(yǎng)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞，觀察血管生成素（angiopoietin，Ang）及其受體Tie2、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表達(dá)變化規(guī)律，探討Ang/Tie2、VEGF對腎小球內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。
　　 方法:（1）體外培養(yǎng)小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse Transcription Polymerase Chain

2、Reaction，RT-PCR）方法觀察正常糖對照組（D-glucose 5.6mmol/l，NG）、高滲對照組（Mannitol 25mmol/l+D-glucose 5.6mmol/l，DM）、高糖刺激組（D-glucose 30mmol/l，HG）不同時間點刺激小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞后，Ang1、Ang2、Tie2、VEGF mRNA表達(dá)的變化。（2）脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染針對Ang2基因的 pcDNA3.1-Ang2質(zhì)粒和Ang2siRNA

3、，24h后RT-PCR法檢測腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Ang2mRNA表達(dá)變化情況。（3）四甲基偶氮唑藍(lán)比色法（MTT）法觀察高糖刺激和轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-Ang2質(zhì)粒24h后腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的增殖情況。（4）Transwell小室法觀察高糖刺激腎小球內(nèi)皮細(xì)胞24h后細(xì)胞遷移率變化情況。
　　 結(jié)果：(1)高糖刺激組Ang1mRNA在12h表達(dá)明顯抑制，24h、72h、96h表達(dá)明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，0h、48h較正常對照組表達(dá)無明顯

4、變化。高糖刺激組Ang2mRNA僅在24h、72h、96h表達(dá)明顯上調(diào)，而在0h、12h、48h與正常對照組比較表達(dá)無明顯變化。高糖刺激組Tie2mRNA在24h、72h、96h較正常對照組表達(dá)明顯升高，在0h、12h、48h與正常對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。（2）高糖刺激組VEGFmRNA在24h、72h、96h較正常對照組表達(dá)明顯升高，在0h、12h、48h與正常組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。（3）轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-Ang2質(zhì)粒和Ang2si

5、RNA 24h后，pcDNA3.1-Ang2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組較正常糖對照組Ang2mRNA明顯升高，Ang2siRNA轉(zhuǎn)染組較高糖刺激組Ang2mRNA明顯抑制，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。(4)pcDNA3.1-Ang2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖較正常對照組明顯增快，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。（5）高糖刺激組與正常糖對照組比較，高糖刺激組腎小球內(nèi)皮細(xì)胞遷移率明顯升高，與正常糖對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：（1）體外培養(yǎng)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)An