水稻瘤矮病毒P8和Pns10基因在sf9昆蟲細胞中的表達.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩56頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的：利用bac-to-bac桿狀病毒表達系統(tǒng)對RGDV-P8和RGDV-Pns10基因加以表達，得到RGDV-P8和RGDV-Pns10基因的真核表達產(chǎn)物，為RGDV-P8和RGDV-Pns10的功能研究奠定基礎(chǔ)。 方法：在RGDV-P8和RGDV-Pns10基因組片段的基礎(chǔ)上設(shè)計引物，擴增得到RGDV-P8和RGDV-Pns10 ORF，將其克隆到供體質(zhì)粒pFastBac<'TM>HTb中，經(jīng)PCR、酶切和測序鑒定后，將測序

2、正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH0Bac菌，經(jīng)篩選、鑒定后，抽提并獲取高純度的重組穿梭載體Bacmid-RGDV-P8和Bacmid-RGDV-Pns10。用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將重組穿梭載體Bacmid-RGDV-P8和Bacmid-RGDV-Pns10轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細胞，獲得重組病毒，并反復(fù)擴增后得到大量表達RGDV-P8和RGDV-Pns10蛋白的重組桿狀病毒。用重組的桿狀病毒再次感染sf9昆蟲細胞得到RGDV-P8和RGDV-Pns10融合蛋白，對融

3、合蛋白進行SDS-PAGE分析和Western-blot鑒定。 結(jié)果： 1．構(gòu)建了攜帶RGDV-p8和RGDV-ns10基因片段的重組供體質(zhì)粒pfastbacHTb-RGDV-P8和pfastbacHTb-RGDV-Pns10，經(jīng)雙酶切鑒定和序列分析證實RGDV-P8和RGDV-Pns10基因已正確插入供體質(zhì)粒的多克隆位點。 2．構(gòu)建了攜帶RGDV-P8和RGDV-Pns10基因片段的重組穿梭載體Bacmid-R

4、GDV-P8和Bacmid-RGDV-Pns10，經(jīng)PCR鑒定分析證實RGDV-P8和RGDV-Pns10基因已正確轉(zhuǎn)座插入穿梭載體的轉(zhuǎn)座位點。 3．用bac-to-bac系統(tǒng)表達了RGDV-P8和RGDV-Pns10融合蛋白，并經(jīng)SDS-PAGE、Westem-blot分析鑒定，分子量約為48kD和38kD，與融合蛋白的理論分子量相符。 結(jié)論：本研究成功地在桿狀病毒一昆蟲表達系統(tǒng)中表達了RGDV-P8和RGDV-Pns

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論