乙型肝炎病毒DNA聚合酶末端蛋白抗α-干擾素功能區(qū)域分析.pdf

1、乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)，可引起由無癥狀病毒攜帶、急慢性肝炎、肝硬化至肝癌的一系列病變。α-干擾素(Interferon-ct，IFN-a)是目前最常用的治療乙型肝炎的藥物之一，它通過建立細胞內(nèi)抗病毒狀態(tài)和免疫調(diào)節(jié)作用抑制并清除病毒。但臨床發(fā)現(xiàn)約2／3的患者表現(xiàn)為對IFN-ot治療無反應(yīng)，即沒有出現(xiàn)HBeAg消失和血清HBVDNA水平降低，這與HBVDNA聚合酶有關(guān)。Foster等發(fā)現(xiàn)，表達HBVDNA聚合

2、酶的末端蛋白(該“末端蛋白”事實上還包括部分Spacer區(qū)，見本文第2部分)可顯著抑制細胞對IFN-a反應(yīng)，并認為是由TP表達阻斷IFN-a通路引起，但其抗IFN-a作用的功能區(qū)域迄今尚不清楚。為此，本研究擬通過構(gòu)建基因缺失突變體方式，研究并確定HBVDNA聚合酶末端蛋白抗IFN-ot反應(yīng)的功能區(qū)域。這一研究不僅有助于深入闡明HBV抗IFN-ot機制，還可為研制新的抗HBV藥物提供新思路。 本研究的第一部分旨在建立肝細胞對IFN

3、-ot反應(yīng)強弱的定量判定標準。為此，將人類6．16基因(一種IFN-ct特異性反應(yīng)基因)啟動子區(qū)克隆到氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶(Chloramphenicolacetyltransferase，CAT)基因上游，構(gòu)建IFN-a反應(yīng)報告載體p6-16CAT。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染該載體的Huh7肝細胞在IFN-ot誘導后CAT表達量顯著增高，并與IFN-ot刺激濃度呈劑量依賴關(guān)系。 本研究的第二部構(gòu)建HBVDNA聚合酶末端蛋白(包括Spacer