醛固酮參與代謝綜合征的形成.pdf

1、目的：
　　 由于目前尚無(wú)特異有效的防治方法，胰島素抵抗（insulin resistence，IR）和代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）的發(fā)病率一直居高不下。最近，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-angiotensin system，RAS）引起關(guān)注，有證據(jù)提示RAS與IR/MS存在重要關(guān)聯(lián)。既往集中于血管緊張素II（angiotensin II，Ang II）的研究，但近年來(lái)醛固酮（aldostero

2、ne，ALD）備受關(guān)注，為系統(tǒng)研究ALD與IR/MS的關(guān)系，本研究的目的在于：①建立以高鹽高脂誘導(dǎo)的IR/MS動(dòng)物模型；②以觀察IR/MS中胰腺ALD的變化規(guī)律，并通過ALD拮抗劑干預(yù)觀察動(dòng)物病情和預(yù)后的改變；③在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究ALD拮抗劑螺內(nèi)酯干預(yù)IR/MS細(xì)胞凋亡通路的機(jī)制。
　　 研究?jī)?nèi)容和方法：
　　 第一部分：MS動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)36只3周齡雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組(每組12只)：(Ⅰ)正常鹽組(0

3、.5％ NaCl，NS)，(Ⅱ)高鹽高脂組(49％fat+4％ NaCl,FS)，(Ⅲ)高鹽高脂+螺內(nèi)酯組(螺內(nèi)酯80mg/kg/day，F(xiàn)S+S)。螺內(nèi)酯溶于飲用水中，在觀察12周后，測(cè)體重(WB)，頸總動(dòng)脈插管直接測(cè)血壓，血漿測(cè)血脂指標(biāo)（TC,TG,LDL-C,HDL-C）,測(cè)血清胰島素和血糖值，根據(jù)穩(wěn)態(tài)胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR index：fasting insulin X fasting glucose/22.5)[1]）

4、評(píng)價(jià)是否存在胰島素抵抗，根據(jù)代謝綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行組間比較評(píng)價(jià)模型是否構(gòu)建成功。
　　 第二部分：在IR/MS模型中胰腺組織的ALD變化建立以高鹽高脂誘導(dǎo)的IR/MS動(dòng)物模型，在觀察12周后分離出胰腺組織，胰腺頭部采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法測(cè)定ALD濃度的變化及Western blotting檢測(cè)鹽皮質(zhì)激素受體（mineralocorticoid receptor，MR）的變化。
　　 胰腺中部

5、行病理檢查觀察胰島β細(xì)胞變化，在此基礎(chǔ)上，著重觀察是否存在細(xì)胞凋亡。采用TUNEL檢查凋亡細(xì)胞。及比較ALD拮抗劑作用后的效果。
　　 第三部分：ALD拮抗劑干預(yù)IR/MS的可能機(jī)制收集NS組、FS組和FS+S組的大鼠胰腺組織，分別提取胰腺尾部組織細(xì)胞提取總蛋白，采用Western blotting方法檢測(cè)胰腺組織中絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）和磷脂酰肌醇3 激

6、酶/蛋白激酶B (PI3-K/Akt)信號(hào)通路的變化。
　　 研究結(jié)果：
　　 第一部分：MS動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)高鹽高脂能夠誘導(dǎo)大鼠在12周后出現(xiàn)典型的IR/MS改變：
　　 ①高血壓：FS組較NS組大鼠血壓明顯增高（BP：189.43±12.83 vs 153.65±20.53，P＜0.01）；
　　 ②血脂異常：FS組較NS組大鼠血脂明顯增高(TC：1.51±0.24 vs.0.88±0.12，TG：0.

7、97±0.54 vs.0.31±0.17，LDL-C：0.90±0.23vs.0.53±0.23，三者均 P＜0.05，但HDL-C：0.83±0.17vs.0.89±0.13，P>0.05)；
　　 ③胰島素抵抗：FS組大鼠胰島素抵抗指數(shù)較NS組明顯升高(HOMA-IR index：2.45±0.36 vs.1.84±0.41，P＜0.01)；
　　 ④體重增加：FS組較NS組大鼠體重明顯增加（BW：326.45±6.

8、84vs.303.3±9.13，P＜0.01）。
　　 該模型指標(biāo)符合代謝綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)，IR/MS模型構(gòu)建成功。
　　 第二部分：在IR/MS模型中胰腺組織的ALD變化1、在IR/MS大鼠胰腺組織中ALD的含量較NS組明顯增高（5722.49±1156.13vs.2337.22±1350.09，P<0.01），提示MS模型存在胰腺ALD濃度升高。Western blotting檢測(cè)ALD結(jié)合的受體MR在FS組表達(dá)亦升高

9、，提示ALD濃度升高同時(shí)也激活了其受體的表達(dá)。
　　 2、免疫組化的結(jié)果顯示，與NS組比較，IR/MS大鼠胰腺組織的胰島素表達(dá)下降；而ALD拮抗劑螺內(nèi)酯處理后胰島素表達(dá)則明顯增強(qiáng)。
　　 3、TUNEL結(jié)果顯示，與NS組比較，F(xiàn)S組細(xì)胞凋亡明顯增加，提示可能是胰島β細(xì)胞減少的原因。而ALD拮抗劑螺內(nèi)酯處理后細(xì)胞凋亡明顯減少，提示ALD拮抗劑螺內(nèi)酯對(duì)胰腺組織損傷及凋亡有明顯保護(hù)作用。
　　 第三部分：ALD拮抗劑干

10、預(yù)IR/MS的可能機(jī)制1、高鹽高脂飲食誘導(dǎo)的IR/MS大鼠胰腺組織中磷酸化的PKB活性減少，而螺內(nèi)酯處理后其活性提高。
　　 2、在高鹽高脂飲食誘導(dǎo)的IR/MS大鼠胰腺組織中，p38的磷酸化明顯增強(qiáng)，而增加螺內(nèi)酯后MAPK磷酸化得到了抑制。
　　 結(jié)論：
　　 1、高鹽高脂飲食誘導(dǎo)的代謝綜合征大鼠的胰腺組織醛固酮含量明顯增加。
　　 2、螺內(nèi)酯 (ALD拮抗劑)能夠明顯改善高鹽高脂飲食誘導(dǎo)的代謝綜合征，改