皮膚光老化機(jī)制研究—紫外線(xiàn)照射對(duì)成纖維細(xì)胞染色體端粒DNA復(fù)制的影響.pdf

1、皮膚老化包括自然老化與光老化，老化由很多機(jī)制共同作用引起。
　　端粒是由串聯(lián)重復(fù)序列組成的位于線(xiàn)性染色體末端的結(jié)構(gòu)，在人類(lèi)是由（GGAGGG）n組成的，并在空間上形成特定的構(gòu)象，控制著與老化相關(guān)的基因表達(dá)和細(xì)胞增殖能力的改變，與老化、腫瘤、基因調(diào)節(jié)密切相關(guān)，研究端粒在這些過(guò)程中的變化及其生物學(xué)功能是目前皮膚老化研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。
　　端粒的長(zhǎng)度及其正常結(jié)構(gòu)的維持決定端粒的功能：直接從活體組織獲得的細(xì)胞，端粒長(zhǎng)度與生理年齡呈現(xiàn)負(fù)

2、相關(guān)；培養(yǎng)細(xì)胞證明，細(xì)胞每分裂一次，端粒大約縮數(shù)十個(gè)至數(shù)百個(gè)堿基對(duì)。當(dāng)端粒變得“相當(dāng)短”時(shí)，細(xì)胞就進(jìn)入老化階段。從更深層次上說(shuō)，端粒長(zhǎng)度還可能影響其附近與老化相關(guān)的基因的表達(dá)。
　　日光中的紫外線(xiàn)是引起皮膚光老化最重要的環(huán)境因素。急性紫外線(xiàn)照射后，可以直接或間接激活老化相關(guān)的信號(hào)通路；還可以抑制膠原的合成最終引起老化相關(guān)改變。已證實(shí)的信息從多個(gè)方面表明自然老化及光老光有著共同的基本的分子通路。端粒是目前公認(rèn)的細(xì)胞老化的分子標(biāo)記，急

3、性日光照射后是否也能使端?？s短進(jìn)入老化的終末通路是一個(gè)值得探索的課題。
　　本試驗(yàn)以人原代成纖維細(xì)胞為對(duì)象，采用紫外線(xiàn)照射和RT-PCR等技術(shù)觀(guān)察急性紫外線(xiàn)損傷對(duì)細(xì)胞增殖活性及染色體端粒復(fù)制的影響,對(duì)光損傷光老化機(jī)制做了更進(jìn)一步的研究。
　　一、紫外線(xiàn)對(duì)人成纖維細(xì)胞增殖活性的影響：
　　使用日光模擬器紫外連續(xù)光譜，光譜范圍為290nm-400nm，以1000-10000mJ/cm2共十個(gè)劑量照射細(xì)胞，并用WST-8檢測(cè)

4、照射后成纖維細(xì)胞的增殖活性，發(fā)現(xiàn)劑量越高，細(xì)胞增殖活性越低。
　　二、自然傳代細(xì)胞端粒長(zhǎng)度變化的驗(yàn)證：
　　參考文獻(xiàn)描述方法，我們對(duì)PCR的反應(yīng)條件進(jìn)行了探索和改進(jìn)，建立了端粒及內(nèi)參基因擴(kuò)增的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；并驗(yàn)證了自然傳代細(xì)胞端粒長(zhǎng)度的動(dòng)態(tài)學(xué)變化。
　　三、紫外線(xiàn)照射對(duì)成纖維細(xì)胞端粒長(zhǎng)度的影響：
　?。ㄒ唬⑹褂幂^小劑量(1000mJ/cm2)紫外線(xiàn)照射成纖維細(xì)胞后并傳代，提取不同代數(shù)成纖維細(xì)胞的DNA，對(duì)比未處理組

5、與紫外線(xiàn)處理組端粒長(zhǎng)度的變化；結(jié)果顯示，小劑量紫外線(xiàn)照射后其端粒長(zhǎng)度有縮短趨勢(shì)，但照射組與對(duì)照組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；且隨著傳代數(shù)目的增加，兩組端粒的長(zhǎng)度均有逐漸縮短的趨勢(shì)。
　?。ǘ?duì)于同代成纖維細(xì)胞，用不同劑量紫外線(xiàn)照射細(xì)胞后,不經(jīng)傳代，提取細(xì)胞DNA，并對(duì)比端粒長(zhǎng)度的變化。結(jié)果示：高劑量(10000mJ/cm2)紫外線(xiàn)處理后成纖維細(xì)胞的端粒較未照射細(xì)胞顯著縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。