不同照射方式下核黃素-A波紫外線交聯(lián)作用對兔鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2表達(dá)及生物力學(xué)變化影響的研究.pdf

1、目的:
　　旨在研究不同照射方式的核黃素A-波紫外線兔鞏膜膠原交聯(lián)實(shí)驗(yàn)對兔鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2表達(dá)及細(xì)胞生物力學(xué)性能的影響，及兩種照射方式是否對視網(wǎng)膜造成損傷。
　　方法:
　　將新西蘭白兔24只隨機(jī)分為A、B兩組，選取左眼選為實(shí)驗(yàn)眼，右眼選為對照眼，麻醉后分離左眼的內(nèi)外直肌間的球結(jié)膜和筋膜，以暴露鼻上方鞏膜。在該處鞏膜滴加0.1％5-磷酸核黃素5分鐘后，用波長為370nm的紫外線的照射，A組照射時間為30分鐘，功

2、率為3.0mW/cm2，B組照射時間為9分鐘，功率為10.0mW/cm2。術(shù)后1周進(jìn)行全視野視網(wǎng)膜電流圖(full-field electroretinogram f-ERG)檢測。術(shù)后60天，處死實(shí)驗(yàn)兔后取實(shí)驗(yàn)眼交聯(lián)部位及對照眼相應(yīng)部位的鞏膜組織提取并培養(yǎng)鞏膜成纖維細(xì)胞，用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定成纖維細(xì)胞后，進(jìn)行細(xì)胞微管吸吮實(shí)驗(yàn)及MMP-2蛋白表達(dá)的western blot實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，t檢驗(yàn)，P＜0.0

3、5為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、兔f-ERG檢查結(jié)果
　　視網(wǎng)膜電流圖表明，A、B兩組的左（交聯(lián)眼）右眼（對照眼）間，暗應(yīng)3.0及明適應(yīng)3.0的振幅、潛伏期均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2、鞏膜成纖維細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果
　　組織培養(yǎng)法提取的鞏膜細(xì)胞免疫組織化學(xué)法的鑒定法顯示:細(xì)胞Vimentin染色呈陽性，胞漿內(nèi)可見清晰的棕黃色陽性反應(yīng)產(chǎn)物，Desmin染色呈陰性，keratin染色呈

4、陰性，S-100染色也呈陰性，上述觀察結(jié)果表明所提取并培養(yǎng)的細(xì)胞為鞏膜成纖維細(xì)胞。
　　3、鞏膜成纖維細(xì)胞微管吸吮
　　本實(shí)驗(yàn)采用微管吸吮技術(shù)測量不同照射方式下，鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性發(fā)現(xiàn):A、B兩組實(shí)驗(yàn)眼（左眼）鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性均分別與各自對照眼（右眼）鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，而A、B兩組實(shí)驗(yàn)眼間、及對照眼間鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)

5、。以上結(jié)果表明，交聯(lián)術(shù)后鞏膜細(xì)胞的粘彈性發(fā)生了明顯的變化，具體表現(xiàn)為粘彈性顯著升高。而兩種照射方式，鞏膜細(xì)胞的粘彈性沒有顯著性的差異。
　　4、鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)
　　經(jīng)過對所提取并培養(yǎng)的鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的western bolt實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示: A組左眼（照射時間為30分鐘，功率為3.0mW/cm2）及B組左眼(照射時間為9分鐘，功率為10.0mW/cm2)提取的鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2表達(dá)明顯高于兩組

6、對照眼提取的鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)。對于兩種不同的照射方式，A組左眼（照射時間為30分鐘，功率為3.0mW/cm2）鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)顯著高于B組左眼(照射時間為9分鐘，功率為10.0mW/cm2)鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)。而A、B兩組右眼（對照眼）鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)未見明顯差異。
　　經(jīng)圖像分析軟件掃描，及統(tǒng)計學(xué)計算，A、B兩組左眼（交聯(lián)眼）鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)量分別為各自組

7、對照眼的1.8倍和1.3倍，差異具有顯著性（t檢驗(yàn)，P=0.001，0.032）;A、B兩組交聯(lián)眼之間比較，鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)量差異具有顯著意義（t檢驗(yàn)，P=0.041）;而A、B兩組右眼（對照眼）間比較，鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)未見顯著性差異（t檢驗(yàn)，P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、核黃素A-波紫外線兔鞏膜膠原交聯(lián)實(shí)驗(yàn)中，選用兩種不同的照射方式，對視網(wǎng)膜功能均無影響，具有較好的安全性。