山葡萄兩個(gè)ICE1同源基因的克隆與表達(dá)特性研究.pdf

1、低溫是限制植物分布與生長(zhǎng)的重要環(huán)境因素，而且低溫凍害是全球農(nóng)林業(yè)普遍存在的自然災(zāi)害，給全世界農(nóng)林業(yè)造成了巨大的損失。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，寒害研究已經(jīng)深入到分子水平，從而促進(jìn)植物抗寒基因工程的發(fā)展。
　　本試驗(yàn)以山葡萄為材料，采用電子克隆技術(shù)從山葡萄 EST數(shù)據(jù)庫(kù)中拼接到兩個(gè)ICE1基因，應(yīng)用戶RT-PCR擴(kuò)增得到兩個(gè)基因編碼區(qū)全長(zhǎng)序列，分別命名為VaICE1a和VaICE1b。結(jié)果如下：
　　VaICE1a基因的cDN

2、A全長(zhǎng)為1617bp，根據(jù)核苷酸推導(dǎo)出的氨基酸序列分析表明它由538個(gè)氨基酸組成，命名為VaICE1a。cDNA序列和編碼的蛋白序列結(jié)果顯示其含有一個(gè)富s區(qū)、核定位信號(hào)區(qū)（NLS）、轉(zhuǎn)膜區(qū)。山葡萄VaICE1a基因與歐洲葡萄(XP-002275711)、蘋(píng)果、毛果楊、歐洲葡萄(XP-002284528)、擬南芥、小麥的同源性分別為99％、61%、62%、64%、60%、76%。該序列在C端高度保守，具有ICE基因典型的BHLH結(jié)構(gòu)域。系

3、統(tǒng)發(fā)育分析將VaICE1a基因歸入ICE1進(jìn)化系。三級(jí)結(jié)構(gòu)分析表明VaICE1a為混合型蛋白。上述結(jié)果表明VaICE1a可能為ICE1基因家族的一個(gè)新成員。半定量PCR結(jié)果表明VaICE1a在山葡萄的不同組織部位均不同程度的表達(dá)，在四種非生物逆境脅迫下VaICE1a基因能夠誘導(dǎo)表達(dá)，與對(duì)照組比較表達(dá)量沒(méi)有明顯差別。
　　VaICE1b基因的cDNA全長(zhǎng)為1653bp，根據(jù)核苷酸推導(dǎo)出的氨基酸序列分析表明它由550個(gè)氨基酸組成，命名

4、為VaICE1b。山葡萄VaICE1b基因的cDNA序列和編碼的蛋白序列結(jié)果顯示其含有一個(gè)富 s區(qū)、核定位信號(hào)區(qū)（NLS）、轉(zhuǎn)膜區(qū)。通過(guò) blast分析發(fā)現(xiàn)山葡萄VaICE1b基因與歐洲葡萄(XP-002275711)、蘋(píng)果、毛果楊、歐洲葡萄(XP-002284528)、擬南芥、小麥的同源性分別為64%、68%、68%、99%、、52%、73%。該序列在C端高度保守，具有ICE基因典型的BHLH結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)發(fā)育分析將VaICE1b基因歸