蟹類過敏原的BALB-c小鼠模型研究.pdf

1、甲殼類過敏是最常見的食物過敏癥之一,已有的研究表明原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是甲殼類主要過敏原,近年的研究發(fā)現(xiàn)精氨酸激酶(Arginine kinase,AK)可能是蝦類過敏原,但其是否為蟹類特異性過敏原至今仍沒有證實,而動物模型能直接模擬過敏的過程及癥狀,因此本文通過動物模型對蟹類過敏原(TM、AK)的致敏性進行評價,以期為其致敏機制的研究以及低致敏性食品、變應(yīng)原的安全性和有效性檢驗研究提供途徑。
　　 本研究

2、通過等電點沉淀、硫酸銨鹽析、加熱處理等方法純化鋸緣青蟹TM,經(jīng)兔抗中華絨螯蟹TM抗體的Western-blot分析證實,采用灌胃、腹腔注射的方式分別建立TM的BALB/c小鼠模型;通過70％-90％硫酸銨鹽析和HiTrap-Q柱層析純化鋸緣青蟹AK,經(jīng)兔抗白蝦AK抗體的Western-blot分析證實,雙向電泳分析其分子量和等電點,采用腹腔注射的方式建立AK的BALB/c小鼠模型。通過模型的過敏癥狀得分評價,糞便組胺檢測,間接酶聯(lián)免疫吸

3、附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清IgE,雙抗夾心ELISA檢測過敏原體外刺激淋巴細胞因子,實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real timepolymerase chain reaction,RT-PCR)檢測IL-4 mRNA相對表達量等,對鋸緣青蟹TM和AK進行致敏性評價。
　　 本研究純化鋸緣青蟹TM的分子量和等電點分別為38 kDa和4.5。TM的小鼠模型研究結(jié)果顯示,

4、腹腔注射和灌胃方式敏化處理的所有小鼠都出現(xiàn)不同程度的過敏癥狀,而IgE水平前者是后者的3倍。腹腔注射方式的淋巴細胞因子IL-4、IL-13、IFNλ水平分別為24.278±1.985 pg/mL、27.776±0.0345 pg/mL、84.243±0.0365 pg/mL,組胺為6342.68 nM;灌胃方式分別為17.508±2.189 pg/mL、3.150±0.434 pg/mL、15.056±1.974 pg/mL和6244.

5、651nM。而陰性對照組(生理鹽水)沒有出現(xiàn)過敏癥狀、特異性IgE水平以及CD4+T細胞,說明兩種方式都是可行的,其中腹腔注射方式的效果更好。IL-4 mRNA的相對表達量TM組為2.788,卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)組為1.98,二者之間沒有顯著差異(p＞0.05)。
　　 本研究純化鋸緣青蟹AK的分子量和等電點分別為40 kDa和6.5。與生理鹽水作為陰性對照的結(jié)果相比,AK和陽性對照OVA的小鼠模型研究結(jié)果顯示

6、,腹腔注射方式敏化處理的所有小鼠都出現(xiàn)不同程度的過敏癥狀,特異性Ige水平明顯增加;AK組的IL-4、IL-13、IFN-λ分別為25.859±0.072 pg/mL、22.716±0.745 pg/mL、114.265±8.220 pg/mL,組胺為6188.3572 nM;OVA組的分別為19.2234±0.988 pg/mL、17.2924±2.831 pg/mL、92.858±2.449pg/mL和6175.489 nM,與陰性

7、對照組(生理鹽水)比較都有顯著差異(p＜0.05),而AK和OVA組之間都沒有顯著差異(p＞0.05)。IL-4 mRNA的相對表達量AK組為1.739,OVA組為1.98,二者之間沒有顯著差異(p＞0.05)。
　　 本研究分別通過腹腔注射、灌胃方式成功地建立了鋸緣青蟹TM的BALB/c小鼠模型,結(jié)果表明腹腔注射方式的效果更好;在此基礎(chǔ)上,通過腹腔注射方式首次建立BALB/c小鼠模型對鋸緣青蟹AK的致敏性進行評價,結(jié)果證實AK