寡聚脫氧核苷酸抑制apoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、寡聚脫氧核苷酸調(diào)節(jié)小鼠Th細(xì)胞分化。 目的：觀察在體外實(shí)驗(yàn)中，包含重復(fù)序列TTAGGG的抑制性寡聚脫氧核苷酸（ODNA151）對小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌Th1、Th2型細(xì)胞因子的影響。 方法：免疫磁珠細(xì)胞分選并純化C57BL/6J小鼠脾CD4+T細(xì)胞，anti-CD3和anti-CD28單抗刺激并按分組分別加入ODN A151（0、1、5、10μM）或ODN 1612（10μM）培養(yǎng)72小時，，再用anti-CD3單

2、抗刺激48h，用雙抗體夾心ELISA法檢測上清中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的含量。 結(jié)果：在ODN A151在濃度為5、10μM時明顯減少上清中IFN-γ和TNF-α含量，而且促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子IL-4和IL-10的分泌；在ODN A151濃度大于5μM時可明顯降低IFN-γ與IL-4的比值。對照的ODN 1612對細(xì)胞因子的分泌沒有作用。 結(jié)論：ODN A151調(diào)節(jié)小鼠脾Th淋巴細(xì)胞的分化，促使Th

3、1/Th2平衡傾向于Th2。 第二部分、寡聚脫氧核苷酸抑制apoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化的作用機(jī)制。 目的：通過研究寡聚脫氧核苷酸對小鼠Th淋巴細(xì)胞分化的影響，探討其抑制動脈粥樣硬化進(jìn)展的機(jī)制。 方法：8周齡的apoE基因敲除小鼠（apoE-/-小鼠）隨機(jī)分成三組，分別隔周腹腔注射ODN A151（TTAGGG）或序列非特異的ODN 1612各300μg+PBS 300μl，對照組注射PBS300μl。給藥16

4、周后分離主動脈，分別以主動脈大體剖面，石蠟切片和冰凍切片三種方法評價斑塊面積百分比（斑塊面積/管腔面積）；Western Blot檢測斑塊局部炎癥分子VCAM-1和MCP-1，以及主要的Th細(xì)胞分化相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白（Th1：T-bet，STAT1、4；Th2：GATA-3，STAT6）的表達(dá)。胞內(nèi)細(xì)胞因子染色檢測各組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中Th1（IFN-γ+CD4+）和Th2（IL-4+CD4+）亞型的比值。 結(jié)果：與對照組相比，O

5、DN A151減少斑塊面積百分比達(dá)49％（8.2±5.9％∶15.6±6.2％，P＜0.05），并有效抑制斑塊局部表達(dá)VCAM-1和MCP-1；同時ODN A151降低Th1淋巴細(xì)胞比值（6.0±2.0％∶4.1±1.7％，P＜0.05）并抑制T-bet，STAT1、4及其磷酸化的表達(dá)，而對Th2淋巴細(xì)胞比值（0.9±0.3％∶1.1±0.6％，P=0.18）和GATA-3，STAT6及其磷酸化的表達(dá)沒有明顯影響。序列非特異的ODN16