“Cocktail”探針藥物法評價丹參酮IIA對大鼠肝微粒體細胞色素P450不同亞型體外代謝活性的影響.pdf

1、目的：
　　建立評價大鼠肝微粒體藥物代謝酶細胞色素P450(Cytochrome P450，CYP450)不同亞型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的“Cocktail”探針藥物溶液的高效液相色譜檢測方法；優(yōu)化肝微粒體孵育條件，建立肝微粒體體外孵育體系，研究丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體該6種主要CYP450亞型體外代謝活性的影響，為臨床合理用藥提供參考。
　　方法：
　

2、　選擇CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的特異性代謝底物咖啡因、美托洛爾、奧美拉唑、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和咪達唑侖制備成“Cocktail”探針溶液，建立同時測定該6種探針藥物在肝微粒體中的高效液相色譜檢測方法。通過優(yōu)化微粒體蛋白濃度和孵育時間，建立肝微粒體體外孵育體系。研究丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體內6種主要CYP亞型活性的影響。實驗分三組進行：丹參酮ⅡA組、空白對照組和無活性組(不加大

3、鼠肝微粒體組)，每組實驗平行三個樣本。應用高效液相色譜.紫外檢測(HPLC-UV)法檢測大鼠肝微粒體中丹參酮ⅡA對探針底物代謝剩余量的影響，得到酶活性百分數(shù)，以丹參酮ⅡA濃度的對數(shù)為橫坐標，以酶活性百分數(shù)為縱坐標，使用GraphPad Prism5.0軟件按照非線性回歸，作圖并計算IC50值。評價丹參酮ⅡA在大鼠肝微粒體孵育體系中對CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4體外代謝活性的影響。<

4、br>　　結果：
　　1.本研究所建立的高效液相色譜方法，可以同時測定6種探針藥物咖啡因、美托洛爾、氯唑沙宗、奧美拉唑、甲苯磺丁脲和咪達唑侖在肝微粒體中的濃度，各吸收峰分離完全，線性關系良好，準確度、精密度及穩(wěn)定性均符合生物樣本檢測要求，操作簡便。
　　2.低濃度(0.5、1、2、4、8、16μmol·L-1)丹參酮ⅢA對大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4酶活性無顯

5、著性影響(P>0.05)，而高濃度(32和96μmol·L-1)丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1酶活性具有抑制作用(P<0.05)。丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1的IC50值分別為32.48、34.76、26.12、26.29和26.38μmol·L-1，表示對其具有弱抑制作用。
　　結論：
　　1.本研

6、究建立的大鼠肝微粒體中的“Cocktail”探針藥物法操作簡便，精密度、準確度、靈敏度高，檢測周期短，能夠同時評價藥物在體外對大鼠肝微粒體6種主要CYP450亞型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的影響。
　　2.丹參酮ⅡA在體外大鼠肝微粒孵育體系中對CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1的代謝活性具有較弱的抑制作用。臨床上通常不易發(fā)生代謝性藥物