復(fù)方扶芳藤合劑口服結(jié)合BMSCs配合FG移植對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)學(xué)的影響.pdf

1、目的：通過檢測模型兔膝骨性關(guān)節(jié)炎(knee osteoarthritis，KOA)的軟骨組織的病理改變，初步闡明復(fù)方扶芳藤合劑結(jié)合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(rabbit bone mesenchymal stem cells，rBMSCs)復(fù)合纖維蛋白凝膠(fibrin glue，F(xiàn)G)移植治療對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨的影響，并探討其作用機(jī)理。
　　方法：1.采用全骨髓貼壁篩選法分離培養(yǎng)BMSCs。取第3代MSCs在地塞米松、左旋Vit C、β

2、-磷酸甘油作用下向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化；在地塞米松、IBMX、吲哚美辛的作用下向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化。觀察細(xì)胞的形態(tài)變化情況，誘導(dǎo)14d后進(jìn)行堿性磷酸酶檢測和油紅O染色以檢測MSCs是否分化成骨和脂肪細(xì)胞。2.本實(shí)驗(yàn)將40只新西蘭大白兔隨機(jī)分為生理鹽水灌胃組（A組），百年樂灌胃組（B組），注射BMSCs+FG復(fù)合物組（C組），百年樂灌胃+注射BMSCs+FG復(fù)合物組（D組），每組10膝。采用管型石膏固定膝關(guān)節(jié)的方式造模，造模6周后采用各組對(duì)應(yīng)的

3、方法處理或治療，治療結(jié)束一周后，空氣栓塞處死試驗(yàn)兔，解剖膝關(guān)節(jié)，肉眼觀察兔關(guān)節(jié)軟骨表面情況；切取部分內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨按照標(biāo)本制備方法制定后，予HE染色、Mallory染色，進(jìn)行光鏡觀察并攝像。
　　結(jié)果：1.原代分離培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞呈長梭形，漩渦狀排列，8～10d達(dá)90％以上融合；傳代后增殖迅速，細(xì)胞為單一的梭形，排列更加有序。BMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后，堿性磷酸酶表達(dá)陽性；經(jīng)脂肪誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后，油紅O染色陽性。2.肉眼觀察： A組

4、關(guān)節(jié)面不光滑，無光澤，軟骨不透明，有明顯缺損和新生物，滑膜色暗充血腫脹。D組關(guān)節(jié)腔未見明顯新生物，色澤較暗，軟骨較光滑但透明差。光鏡觀察：A組關(guān)節(jié)軟骨層變薄、粗糙，部分區(qū)域軟骨細(xì)胞核固縮、壞死。淺表層軟骨細(xì)胞消失，過渡層細(xì)胞外露，輻射層細(xì)胞增生呈簇狀、染色質(zhì)粗、不均勻，甚至軟骨下骨囊性變。四層結(jié)構(gòu)不易分辨。B、C組軟骨表面欠光滑，裂隙少，裂隙周圍細(xì)胞明顯增多，軟骨層輕度變薄，過渡層細(xì)胞和輻射層細(xì)胞輕度增生，染色質(zhì)分布較均勻，四層結(jié)構(gòu)基本

5、清晰。D組軟骨表面基本完整，軟骨細(xì)胞數(shù)量增多，四層結(jié)構(gòu)基本清晰，潮線結(jié)構(gòu)基本完整。Mankin’S評(píng)分為A組7.60±0.69，B組5.50±0.61，C組5.80±0.81，D組5.00±0.67，B、C、D組與A組比較有差異(P＜0.05)，D組與B、C組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：1.全骨髓貼壁篩選法分離培養(yǎng) BMSCs，可有效分離和擴(kuò)增BMSCs，分離培養(yǎng)的BMSCs生長穩(wěn)定，增殖力強(qiáng)。2.利用復(fù)方扶芳藤合