體外間接共培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨單位對(duì)軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的：
　　通過Transwell間接共培養(yǎng)技術(shù)研究兔膝關(guān)節(jié)軟骨單位對(duì)軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,為組織工程技術(shù)修復(fù)損傷軟骨選取良好種子細(xì)胞提供依據(jù)。
　　方法：
　　用不同消化酶將2月齡新西蘭兔膝關(guān)節(jié)軟骨分別消化成軟骨細(xì)胞和軟骨單位。按2×105個(gè)細(xì)胞/孔濃度接種于Transwell雙層細(xì)胞培養(yǎng)板。實(shí)驗(yàn)組：軟骨單位接種于上室，軟骨細(xì)胞接種于下室；對(duì)照組：下室接種軟骨細(xì)胞，上室未接種。分別在2、4、6、8天提取各組Tra

2、nswell下室軟骨細(xì)胞進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。早期凋亡率檢測(cè)：Annexin V和7-AAD標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)，TUNEL染色熒光顯微鏡檢測(cè)；增殖率檢測(cè)：PCNA標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)，EdU染色熒光顯微鏡檢測(cè)；相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)：PCR技術(shù)檢測(cè)AGG、Col-II、MMP-13基因相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　Annexin V和7-AAD標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)Transwell下室軟骨細(xì)胞早期凋亡率發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)早期（第2、4天）實(shí)驗(yàn)

3、組與對(duì)照組Transwell下室軟骨細(xì)胞早期凋亡率差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。在實(shí)驗(yàn)第6天、第8天實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞早期凋亡率明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。TUNEL染色熒光顯微鏡檢測(cè)Transwell下室軟骨細(xì)胞凋亡率發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組軟骨細(xì)胞凋亡率沒有顯著差異，但有實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞凋亡率低于對(duì)照組的趨勢(shì)。PCNA標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)Transwell下室軟骨細(xì)胞增殖率發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)早期（第2、4天）實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組Tra

4、nswell下室軟骨細(xì)胞增值率差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。在實(shí)驗(yàn)第6天、第8天實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞增殖率明顯高于對(duì)照組
　?。≒<0.05）。EdU染色熒光顯微鏡檢測(cè)Transwell下室軟骨細(xì)胞增殖率發(fā)現(xiàn)，第6天實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞增殖率明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。PCR技術(shù)檢測(cè)Transwell下室軟骨細(xì)胞相應(yīng)基因表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)早期（第2、4天）實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組Transwell下室軟骨細(xì)胞AGG、Col-II，

5、MMP-13基因表達(dá)較為相似，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在實(shí)驗(yàn)后期AGG、Col-II基因相對(duì)表達(dá)量在第6天、第8天時(shí)實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組（P<0.05），MMP-13表達(dá)量在第8天時(shí)對(duì)照組明顯高于實(shí)驗(yàn)組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.軟骨單位作為關(guān)節(jié)軟骨的基本功能單位，能夠更長時(shí)間有效抵抗或延緩軟骨細(xì)胞凋亡、維持軟骨細(xì)胞增殖及正向調(diào)節(jié)軟骨基質(zhì)相關(guān)物質(zhì)的基因表達(dá)。
　　2.軟