快速產(chǎn)前診斷13、X和Y染色體非整倍體的研究.pdf

1、目的:
　　 1篩選出天津漢族群體13、X和Y染色體上遺傳信息含量高的短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat, STR)基因座，建立快速診斷13、X和Y染色體非整倍體的技術(shù)，為用STR基因座產(chǎn)前診斷13、X和Y染色體非整倍體提供實驗依據(jù)。
　　 2建立快速產(chǎn)前診斷13、X和Y染色體非整倍體的技術(shù)，探討定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative fluorescence polymerase chain

2、 reaction, QF-PCR)擴(kuò)增STR基因座在快速產(chǎn)前診斷中的臨床應(yīng)用價值。
　　 方法:
　　 1根據(jù)文獻(xiàn)報道選擇13、X和Y染色體上30個基因座作為候選基因座，應(yīng)用QF-PCR、毛細(xì)管電泳研究其在350例無親緣關(guān)系天津漢族個體中的遺傳多態(tài)性。ABI Prism GeneMapper v3.0軟件分析數(shù)據(jù)，得出片段大小、峰面積、峰圖等相關(guān)數(shù)據(jù)。直接計數(shù)法觀察各基因座的等位基因頻率和基因型頻率，基因型頻率的觀察值

3、和理論值用x2檢驗，驗證是否符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)。采用PowerStatsV12軟件分析STR基因座的期望雜合度(expected heterozygosity,He)、觀察雜合度(observed heterozygosity, Ho)、多態(tài)信息量（polymorphicinformation content, PIC）、個體識別率(power of discrimination, PD)、非父排除

4、率(power of exclusion, PE)等群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。用SPSS17.0軟件統(tǒng)計雜合子峰面積比值范圍、峰面積比值均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)和95％可信區(qū)間(confidenceinterval, CI)。每個STR基因座測序2個純合子樣本，對比分析后確定其重復(fù)序列及重復(fù)次數(shù)。
　　 2 QF-PCR擴(kuò)增篩選出的高遺傳信息量STR基因座，對362例外周血樣本和452例產(chǎn)前診斷樣本（包括373例羊水、79例絨毛）進(jìn)行檢

5、測，并將結(jié)果與染色體核型分析結(jié)果比較。
　　 結(jié)果:
　　 113、X和Y染色體STR基因座遺傳多態(tài)性結(jié)果
　　 1.1根據(jù)易于擴(kuò)增、結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好、高信息量等標(biāo)準(zhǔn)，最終確定13號染色體D13S305、D13S631和D13S634基因座、X染色體HPRTB、DXS6803和 DXS6809基因座、Y染色體DYS19、DYS390和DYS393基因座為本研究的基因座。
　　 1.2350例天津漢族人群

6、中13號染色體D13S305、D13S631和D13S634基因座的重復(fù)序列為CTTT、ATCT和AAGA，分別發(fā)現(xiàn)11、7和11個等位基因，42、22和29種基因型?；蛐头植冀?jīng)x2檢驗，符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)。3個基因座的He分別為0.833、0.754、0.796，Ho為0.809、0.714、0.757，PIC為0.810、0.714、0.765, PD為0.948、0.893、0.927, P

7、E為0.615、0.451、0.522。
　　 1.3150例天津漢族女性中X染色體HPRTB、DXS6803和DXS6809基因座的重復(fù)序列為TCTA、GATA和ATCT，分別發(fā)現(xiàn)10、6和10個等位基因，22、12和29種基因型。基因型分布經(jīng)x2檢驗，符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)。3個基因座的He分別為0.748、0.649、0.806，Ho為0.607、0.700、0.713，PIC為0.706

8、、0.599、0.775, PD為0.894、0.814、0.931, PE為0.299、0.428、0.449。
　　 1.4200例天津漢族男性中Y染色體DYS19、DYS390和DYS393基因座的重復(fù)序列為TAGA、TCTA和TATC，分別發(fā)現(xiàn)5、6和6個等位基因，基因多樣性(gene diversity, GD)為0.743、0.731、0.634。
　　 1.513號染色體D13S305、D13S631、D1

9、3S634基因座和X染色體HPRTB、DXS6803、DXS6809基因座雜合子峰面積比值范圍介于0.68～1.49之間，峰面積比值(x)±s為1.09±0.18，95％CI為1.08～1.10。
　　 2基因診斷和產(chǎn)前基因診斷染色體非整倍體結(jié)果
　　 2.1基因診斷結(jié)果
　　 362例外周血樣本QF-PCR均擴(kuò)增成功。352例樣本未見異常，3例47，XXY、4例45，X、1例47,XYY、1例46，XY女性和1

10、例45，X/47，XYY（嵌合比例60％）得到診斷。與染色體核型分析結(jié)果相比，360例樣本結(jié)果一致，2例嵌合體因為嵌合比例較低，分別為6％和5％，未能檢出。
　　 2.2產(chǎn)前基因診斷結(jié)果
　　 2.2.1452例產(chǎn)前診斷樣本，均成功檢測出胎兒性別，包括219例男性胎兒和233例女性胎兒，與染色體核型分析結(jié)果相符。
　　 2.2.2 D13S305、D13S631、D13S634、HPRTB、DXS6803、DXS

11、6809、DYS19、DYS390和DYS393基因座分別有20、12、12、37、13、35、35、19和18例樣本擴(kuò)增失敗。統(tǒng)計數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)共有415例樣本9個基因座均擴(kuò)增成功，擴(kuò)增的成功率為91.81％(415/452)。
　　 2.2.3 D13S305、D13S631、D13S634、HPRTB、DXS6803和DXS6809基因座正常雜合子峰面積比值范圍介于0.70～1.48之間，峰面積比值(x)±s為1.12±0.18

12、，95％CI為1.10～1.14。
　　 2.2.4擴(kuò)增成功的樣本中發(fā)現(xiàn)3例QF-PCR結(jié)果異常，包括1例13-三體、1例47，XXY和1例45,X，其余412例未見異常，QF-PCR結(jié)果與染色體核型分析相符。
　　 2.3 QF-PCR擴(kuò)增STR基因座診斷13、X和Y染色體非整倍體的靈敏度為86.67％(13/15)，特異度為100％(762/762)。
　　 結(jié)論:
　　 1本研究顯示D13S305、