MT-3和MT-1E基因轉梁食管鱗癌細胞株對其細胞周期的影響.pdf

1、目的:食管癌是目前對人類健康和生命構成嚴重威脅的惡性腫瘤之一,其病死率在世界范圍居惡性腫瘤的第七位。我國是食管癌的高發(fā)國家,在我國惡性腫瘤中其發(fā)病率居第四位,特別是河北南部、河南北部及山西的部分地區(qū)為高發(fā)地區(qū)。因此,深入研究食管癌的發(fā)病機制,以有效地對其進行預防和治療有著非常重要的意義。研究表明,食管癌的發(fā)生發(fā)展并非單個分子事件,而是一個多因素、多階段、長時間的多步驟過程,涉及多個癌基因和抑癌基因的改變以及細胞調控機制的異常。
　

2、　 有關MT-1和MT-2基因的研究已有很多,有文獻報道MT-1和MT-2基因在食管癌組織中呈高表達狀態(tài)。而MT-3基因研究的較少,已知MT-3基因是細胞內一種金屬硫蛋白的編碼基因,不僅具有許多重要的生理功能,還可以抑制細胞增殖。我們的前期研究顯示在食管癌組織中廣泛存MT-3基因的超甲基化,而且這種超甲基化可導致MT-3表達水平的下調。基于以上研究,本實驗采用基因轉染技術,研究MT-3和MT-1E基因轉染人食管鱗癌Eca-109和TE

3、13細胞株后對其細胞周期的影響。
　　 方法:1選取食管鱗癌Eca-109和TE13細胞株,用RPMI1640培養(yǎng)基在六孔板中進行培養(yǎng),在細胞匯合達70％后,準備進行細胞轉染。
　　 2分別取含有EX-T3737-M03-MT-3、EX-T3737-M03、EX-T2598-M56-MT-1E及EX-T2598-M56四種質粒DNA的大腸桿菌菌株,經(jīng)過夜培養(yǎng)后提取質粒DNA,并測定其濃度與純度;然后配制質粒DNA/脂質體

4、復合物,并設空白對照,進行細胞轉染。
　　 3將以上質粒DNA/脂質體復合物與兩種細胞株共同培養(yǎng),分別在24h、48h、72h用熒光顯微鏡觀察質粒DNA中熒光蛋白在細胞內的表達情況,并計算細胞轉染效率,以確定質粒DNA在細胞內最佳轉染時間。
　　 4在質粒DNA轉染Eca-109和TE13細胞株48h后,分別收集六孔板中各轉染組細胞及空白對照組細胞,應用流式細胞術檢測細胞周期的變化情況。
　　 5所有計量資料用均

5、值±標準差表示,兩樣本均數(shù)比較選擇t檢驗或t’檢驗,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義,統(tǒng)計過程由SPSS13.0統(tǒng)計軟件完成。
　　 結果:1四種質粒DNA轉染食管鱗癌Eca-109及TE13細胞株后,在24h、48h、72h熒光顯微鏡觀察到各轉染組均見有熒光標記。EX-T3737-M03-MT-3和其空載體EX-T3737-M03轉染組呈綠色熒光;EX-T2598-M56-MT-1E和其空載體EX-T2598-M56轉染組呈紅

6、色熒光。轉染48h后細胞熒光表達強度最強,約占細胞總數(shù)的80％,提示轉染成功,且效率較高。
　　 2 EX-T3737-M03-MT-3和EX-T3737-M03在轉染Eca-109和TE13細胞株48h后,其G0/G1期的細胞比例分別為70.97±1.58％、53.20±2.13％(P＜0.05),S期的細胞比例分別為14.32±1.23％、31.50±1.59％(P＜0.05),G2/M期的細胞比例分別為14.72±1.08

7、％、15.30±1.38％(P＞0.05)。
　　 3 EX-T2598-M56-MT-1E和EX-T2598-M56在轉染Eca-109和TE13細胞株48h后,其G0/G1期的細胞比例分別為54.58±2.38％、53.02±2.16％(P＞0.05),S期的細胞比例分別為30.15±1.77％、31.90±1.71％(P＞0.05),G2/M期的細胞比例分別為15.27±1.06％、15.08±0.78％(P＞0.05)。

8、
　　 4 EX-T3737-M03-MT-3和EX-T2598-M56-MT-1E在轉染Eca-109和TE13細胞株48h后,其G0/G1期的細胞比例分別為70.97±1.58％、54.58±2.38％(P＜0.05),S期的細胞比例分別為14.32±1.23％、30.15±1.77％(P＜0.05),G2/M期的細胞比例分別為14.72±1.08％、15.27±1.06％(P＞0.05)。
　　 結論:1 MT-3