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文檔簡介
1、目的:研究納米銀(Nano-silver)與表皮生長因子(EGF)結(jié)合成復合體的最佳反應條件及表皮生長因子在不同濃度下與納米銀的結(jié)合率,為納米銀--表皮生長因子復合體的制備提供依據(jù)。 方法與材料:先配制終濃度為200μg/ml的表皮生長因子和濃度為5000ppm的納米銀溶液。在不同反應條件下混合表皮生長因子和納米銀溶液,并以超聲分散方法制備對應的納米銀表皮生長因子復合體(復合體中EGF終濃度為50μg/ml,納米銀終濃度為500
2、ppm),再分組進行檢測。實驗分為單純表皮生長因子組、單純納米銀組、納米銀表皮生長因子復合體組(簡稱復合體組)、蒸餾水對照組。復合體組依據(jù)不同反應條件分為不同亞組:①依pH值不同分為5.0、6.0、7.0和8.0四個亞組;②依反應溫度不同分為4℃、25℃和37℃三組;③依反應時間不同分為12小時、24小時和36小時三組。在上述各種反應條件下對反應產(chǎn)物進行低溫高速離心(4℃,13000rpm)30分鐘,取上清液(反復離心至上清液澄清),將
3、上清液進行Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Tricine-SDS-PAGE電泳),再利用Image Quant350凝膠成像系統(tǒng)軟件對電泳結(jié)果進行定量分析,從而得到各組上清液中EGF相對含量百分率,進一步計算出不同反應條件下表皮生長因子與納米銀的結(jié)合率,并尋找兩者的最佳結(jié)合條件。然后在最佳反應條件下,取濃度分別為50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml的表皮生長因子與500ppm的納米銀進行復合,再
4、次利用Tricine-SDS-PAGE電泳及Image Quant350凝膠成像系統(tǒng)軟件分析觀察不同濃度的表皮生長因子與固定濃度納米銀溶液的結(jié)合率,得出表皮生長因子隨濃度變化與納米銀結(jié)合率的變化。 結(jié)果:Tricine-SDS-聚丙烯酰胺電泳實驗中單純表皮生長因子組和納米銀--表皮生長因子復合體組有明顯條帶,單純納米銀組和蒸餾水對照組未見電泳條帶。pH值為5.0、6.0、7.0、8.0的反應條件下制備的納米銀--表皮生長因子復合
5、體的相對結(jié)合率分別為:17.39%±0.11%、16.09%±0.17%、28.32%±0.10%、19.36%±0.23%,經(jīng)統(tǒng)計學分析,不同pH值下表皮生長因子與納米銀反應的結(jié)合率有明顯差異;各pH值下復合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05,有統(tǒng)計學意義,pH值為7.0時的結(jié)合能力最強。溫度為4℃、25℃、37℃的反應條件下制備的復合體的相對結(jié)合率分別為:23.20%±1.17%、15.51%±0.74%、29.89%±0.80%,
6、具有明顯差異;各反應溫度下復合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05,有統(tǒng)計學意義,溫度為37℃時的結(jié)合率最高。反應時間為12小時、24小時、36小時制備的復合體的相對結(jié)合率分別為:28.55%±0.15%、33.41%±0.24%、17.29%±0.19%,具有明顯差異;各反應時間下復合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05,有統(tǒng)計學意義,反應時間為24h時的結(jié)合率最高。在納米銀濃度為500ppm溶液中,表皮生長因子的濃度為50μg/ml、7
7、5μg/ml、100μg/ml、150μg/ml時的相對結(jié)合率分別為:26.27%±0.58%、21.29%±0.47%、19.03%±0.59%、16.48%±0.24%,可見在濃度固定的納米銀溶液下,不同濃度表皮生長因子與納米銀復合體的結(jié)合率具有明顯差異,不同濃度EGF條件下復合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05,有統(tǒng)計學意義,表皮生長因子與納米銀的結(jié)合率隨著表皮生長因子的濃度升高逐漸下降,絕對結(jié)合量隨表皮生長因子濃度升高而升高。
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