活性氧參與背根神經(jīng)節(jié)慢性壓迫致鏡像痛的外周機(jī)制研究.pdf

1、[研究目的]
　　 鏡像痛(mirror-image pain，MIP)是指當(dāng)軀體某一部位損傷后，除了導(dǎo)致?lián)p傷部位出現(xiàn)自發(fā)性疼痛或痛覺(jué)過(guò)敏，有時(shí)還可導(dǎo)致身體對(duì)側(cè)相應(yīng)的部位出現(xiàn)自發(fā)性疼痛或痛覺(jué)過(guò)敏。臨床上復(fù)雜區(qū)域疼痛綜合征患者可觀察到雙側(cè)肢體出現(xiàn)明顯的異常疼痛現(xiàn)象。在多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上也有由外周神經(jīng)損傷引起鏡像痛的報(bào)道，但引起這種異常改變的因素和機(jī)制目前并不十分清楚。因此，對(duì)鏡像痛的發(fā)病機(jī)制或影響因素展開(kāi)進(jìn)一步的探索，將為我們尋找

2、新的有效治療神經(jīng)病理性疼痛的藥物及預(yù)防鏡像痛的發(fā)生提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 近來(lái)研究表明，活性氧(reactive oxygen species，ROS)引發(fā)的氧化應(yīng)激廣泛參與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生和維持過(guò)程，在疼痛的發(fā)生、痛覺(jué)敏化的形成和維持具有重要作用。正常情況下，細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生與清除處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，活性氧濃度很低不會(huì)引起傷害，然而一旦這種平衡被打破，就可能產(chǎn)生傷害作用，引起一系列生理生化變化。氧化應(yīng)激可以激活多種疼痛相關(guān)離

3、子通道，影響突觸間神經(jīng)遞質(zhì)的效能，及調(diào)節(jié)蛋白激酶類(lèi)的活性，在疼痛信息的傳遞中發(fā)揮重要作用。
　　 背根神經(jīng)節(jié)慢性壓迫模型(chronic compression of the dorsal root ganglion，CCD)模擬臨床椎間孔狹窄、椎間盤(pán)突出產(chǎn)生的神經(jīng)腰背下肢痛，保留了外周初級(jí)傳入與傳出的功能。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道以及我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中的觀察，大鼠一側(cè)背根神經(jīng)節(jié)受壓迫造成損傷側(cè)痛覺(jué)過(guò)敏的同時(shí)，還可誘發(fā)大鼠損傷對(duì)側(cè)足底產(chǎn)生痛覺(jué)過(guò)敏

4、.即實(shí)驗(yàn)性鏡像痛覺(jué)過(guò)敏。既然ROS廣泛參與神經(jīng)病理性疼痛，那么其是否與CCD大鼠表現(xiàn)出的鏡像痛行為有聯(lián)系？
　　 為此，本研究觀察CCD模型對(duì)側(cè)DRG組織內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)變化并探索ROS清除劑PBN對(duì)CCD大鼠鏡像痛行為的影響，以初步明確ROS在鏡像痛發(fā)生機(jī)制中作用。
　　 [研究方法]
　　 1.建立CCD神經(jīng)病理性疼痛模型并通過(guò)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
　　 1.1.參照San-Jue Hu方法建立CCD模型

5、r>　　 1.2.采用von frey纖維絲檢驗(yàn)大鼠損傷對(duì)側(cè)是否產(chǎn)生痛覺(jué)過(guò)敏
　　 用von frey纖維絲測(cè)試建模前后大鼠機(jī)械性刺激縮足反射閾值(paw withdrawalmechanical threshold, PWMT)，觀察CCD及假手術(shù)組大鼠術(shù)前、術(shù)后1、3、5、7 d PWMT變化。
　　 2.觀察ROS清除劑PBN對(duì)CCD大鼠痛行為的影響
　　 通過(guò)行為學(xué)方法觀察CCD大鼠在腹腔注射PBN后0

6、.5、1、2、4、6、8、24 h PWMT變化。
　　 3.觀察CCD大鼠術(shù)后對(duì)側(cè)DRG組織內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化
　　 通過(guò)比色法檢測(cè)假手術(shù)組，CCD術(shù)后第3d和第7d及注射PBN后在0.5、2h對(duì)側(cè)DRG組織內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)變化。
　　 [結(jié)果]
　　 1.CCD大鼠模型的建立及鏡像性痛覺(jué)敏化的時(shí)程
　　 Von frey纖維絲檢測(cè)CCD大鼠機(jī)械性刺激縮足反射閾值(PWMT)，與假手術(shù)組相比，C

7、CD大鼠非壓迫側(cè)痛閾值在建模后第1d開(kāi)始降低（P＜0.05 vs術(shù)前），自第3d出現(xiàn)明顯的鏡像性痛覺(jué)過(guò)敏（P＜0.05 vs假手術(shù)組，P＜0.05 vs術(shù)前）。
　　 2.ROS在CCD大鼠對(duì)側(cè)DRG組織內(nèi)表達(dá)上調(diào)
　　 結(jié)果顯示，CCD大鼠建模后第7d，MDA含量和SOD酶活性升高（P均＜0.05 vs正常組），H2O2、 CAT酶變化不明顯（P均＞0.05 vs正常組）。
　　 3.PBN對(duì)CCD大鼠鏡像痛行

8、為及氧化應(yīng)激的影響
　　 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CCD大鼠建模后第7d鏡像痛行為已穩(wěn)定，腹腔給予PBN100 mg/kg0.5 h，顯著抑制了CCD大鼠鏡像性機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏（P＜0.05 vs生理鹽水組）;生化結(jié)果顯示，腹腔給予PBN后，能夠降低CCD大鼠對(duì)側(cè)DRG內(nèi)的氧化應(yīng)激程度。
　　 [結(jié)論]
　　 1.在背根神經(jīng)節(jié)慢性壓迫后7d，大鼠形成鏡像性機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏現(xiàn)象，大鼠對(duì)側(cè)DRG組織內(nèi)氧化應(yīng)激程度增加，時(shí)程與大鼠