槐耳清膏抑制A549細胞和TSC2失活細胞生長及機制的研究.pdf

1、槐耳為多孔菌科真菌槐栓菌的子實體，生長于槐、洋槐及青檀等樹干上。槐耳的熱水提取物槐耳清膏廣泛作用于多種惡性腫瘤，包括結腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等，在臨床治療或者輔助西藥治療中取得一定確切的療效。值得注意的是這些腫瘤組織中都存在哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號高度活化。槐耳清膏能治療多種腫瘤，但其具體的機制仍不清楚，它在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用也尚未完全明確。
　　mTO

2、R在一系列控制細胞的生長、增殖、分化和存活等細胞信號通路中處于核心地位，它受上游的原癌基因如RTKs、PI3K和AKT，和抑癌基因如PTEN、TSC1和TSC2的調控。這些原癌基因和抑癌基因的異常激活或失活都將導致mTOR信號通路的過度活化而致瘤，因此mTOR表達異常在腫瘤細胞中十分常見。
　　自噬是溶酶體介導的對細胞內蛋白質和細胞器降解的動態(tài)過程，是真核細胞特有的生命現象。自噬受mTOR信號直接調節(jié)，對腫瘤細胞具有促進生長或者抑

3、制增殖的作用。
　　鑒于槐耳清膏對多種mTOR信號高表達的腫瘤有抑制作用，我們體外觀察槐耳清膏作用的A549細胞mTOR信號表達水平和自噬發(fā)生水平的變化，論文第一部分表明:槐耳清膏能夠通過下調mTOR信號抑制A549細胞增殖，增強A549細胞自噬?；倍甯嗾T導的A549自噬增強對細胞的生存具有促進作用。
　　結節(jié)硬化癥(Tuberous Sclerosis Complex，TSC)是TSC1/TSC2蛋白復合物的功能喪失激活

4、了蛋白激酶mTOR，從而導致細胞生長和增殖的失控。Rapamycin（中文譯名，雷帕霉素）是一種特異的mTOR蛋白抑制劑，rapamycin類似物，如依維莫司是目前臨床上非常有潛力的治療結節(jié)性硬化癥的藥物。但有研究表明rapamycin類似物治療結節(jié)性硬化癥有耐藥病例的出現，且rapamycin類似物價格高昂，rapamycin類似物的治療之余也出現了很多副作用。研究發(fā)現，雖然rapamycin能特異性的抑制mTOR的活性，但是rapa

5、mycin抑制mTOR同時解除了mTOR對RTK/PI3K/AKT和ERK/MAPK等信號級聯(lián)的負反饋抑制，這些作用都降低了rapamycin的療效。
　　論文第一部分研究發(fā)現槐耳清膏能夠體外抑制A549細胞mTOR信號的活化。對此，我們設想槐耳清膏是否能夠治療以mTOR信號高度活化為突出特點的結節(jié)性硬化癥。我們使用廣泛應用的TSC2基因失活的細胞模型（TSC2敲除的小鼠胚胎成纖維細胞TSC2-/-MEFs、TSC2基因突變的大鼠

6、子宮肌瘤細胞ELT-3）來驗證我們的假設。
　　論文第二部分表明:槐耳清膏能夠體外抑制TSC2-/-MEFs和ELT-3的生長。進一步研究發(fā)現槐耳清膏能夠下調TSC2-/-MEFs和ELT-3的mTOR信號。mTOR信號對于細胞自噬有直接的調節(jié)作用，本實驗發(fā)現，槐耳清膏能夠在體外抑制細胞生長的同時，誘導細胞自噬，這種自噬的誘導依賴于槐耳清膏對mTOR信號的下調。自噬對細胞有多種作用，一定濃度的槐耳清膏誘導的細胞自噬能夠促進TSC2