槐耳清膏抑制肺癌血管生成及其分子機理的實驗研究.pdf

1、背景與目的：肺癌是發(fā)病率和死亡率增加最快，對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。雖然近年來肺癌的基礎與臨床研究均取得了一定進展，但遺憾的是肺癌的治愈率目前仍然低于15％。究其原因，一方面是目前尚無肺癌早期診斷的有效方法，絕大多數(shù)患者就診時已屬晚期，失去了外科治療指征；另一方面，人們對晚期肺癌缺乏行之有效的治療手段?；熥鳛橥砥诜伟┳钪饕闹委熓侄危浏熜б堰M入一個平臺期，并且具有顯著的毒副作用。因此，研究和開發(fā)更新和更有效的抗肺癌藥物，是

2、目前和未來肺癌研究領域的前沿和熱點課題。隨著現(xiàn)代分子生物理論和技術的進展，以及人類基因組計劃的完成，使人類開發(fā)特異性針對肺癌分子靶點的“分子靶向藥物”成為可能，其中以抗肺癌血管生成為靶點的分子靶向治療就是其中比較重要的一種策略?，F(xiàn)有的臨床前和臨床研究結果皆顯示了抗腫瘤血管生成分子靶向藥物治療具有很好的臨床療效和廣闊的臨床前景。 在我國，中醫(yī)藥治療腫瘤病癥有著悠久的歷史，具有不同于西醫(yī)的特殊性，并且具有十分豐富的中醫(yī)藥資源。由于血

3、管生成在腫瘤的發(fā)生發(fā)展，侵襲及轉移中有著重要的地位，因此開發(fā)與血管生成相關的中藥新藥具有十分重要的臨床意義。因此，本研究的目的是：（1）槐耳清膏對人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981的凋亡指數(shù)和細胞周期有何影響？（2）槐耳清膏對肺癌細胞β－catenin，E－cadherin，TIMP－1，CD44v6，MMP－2，Endostatin，VEGF表達水平有何影響？（3）槐耳清膏是否對人L9981肺癌細胞株具有抑制作用，其機制是什么？（4）

4、槐耳清膏對人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981在裸鼠體內成瘤性有何影響？（5）槐耳清膏對人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981移植瘤遠處轉移率有何影響，其分子機制是什么？（6）槐耳清膏對順鉑的副作用有何影響？ 方法：（1）本研究應用不同藥物處理nm23－H1基因缺失的人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981，應用流式術檢測不同藥物處理組人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981細胞周期、凋亡指數(shù)和血管生成相關因子（β－catenin，E－cadhe

5、rin，TIMP－1，CD44v6，MMP－2，Endostatin，VEGF）表達水平的變化；（2）應用人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981移植瘤實驗動物模型觀察了不同藥物處理組人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981在裸鼠體內成瘤性、抑瘤率、移植瘤生長曲線、移植瘤肺轉移數(shù)/率和裸鼠體重的變化。 結果：（1）槐耳清膏組細胞的凋亡指數(shù)顯著高于對照組（P＝0.036），但顯著低于順鉑組（P＝0.000）和聯(lián)合化療組（P＝0.000），聯(lián)合

6、化療組的凋亡指數(shù)顯著高于順鉑組（P＝0.02）。（2）槐耳清膏組G0/G1期細胞比例顯著高于對照組（P＝0.046），但顯著低于順鉑組（P＝0.000）和聯(lián)合化療組（P＝0.000）；聯(lián)合化療組與順鉑組間比較無統(tǒng)計學差異（P＝0.22）?；倍甯嘟MS期細胞比例顯著高于對照組組（P＝0.04），但顯著低于順鉑組（P＝0.000）和聯(lián)合化療組（P＝0.000），而順鉑組與聯(lián)合化療組間比較無統(tǒng)計學差異（P＝0.55）。（3）槐耳清膏組β-ca

7、tenin表達水平均顯著高于對照組（р=0.000），順鉑組（р=0.000）和聯(lián)合化療組（р=0.001），但順鉑組與聯(lián)合化療組間比較無統(tǒng)計學差異（р＝0.34）。（4）槐耳清膏組MMP－2表達水平與對照組間比較無統(tǒng)計學差異（р=0.26），但顯著低于順鉑組（р=0.000）和聯(lián)合化療組（р=0.000），順鉑組與聯(lián)合化療組間比較無統(tǒng)計學差異（р=0.71）。（5）槐耳清膏組TIMP－1表達水平顯著高于對照組（р=0.003），但顯著

8、低于順鉑組（р=0.02）和聯(lián)合化療組（р=0.001），而順鉑組與聯(lián)合化療組間比較無統(tǒng)計學差異（р=0.089）。（6）槐耳清膏組VEGF表達水平顯著低于對照組（р=0.017），順鉑組（р=0.000）和聯(lián)合化療組（р=0.01），但順鉑組VEGF表達水平顯著高于聯(lián)合化療組（р=0.000）。（7）槐耳清膏組內皮抑素表達水平與對照組間比較無統(tǒng)計學差異（р=0.053），但顯著低于順鉑組（р=0.000）和聯(lián)合化療組（р=0.000）

9、，順鉑組內皮抑素表達水平亦顯著低于聯(lián)合化療組（р＝0.002）。（8）槐耳清膏組E－鈣粘素表達水平與對照組（р=0.465）和聯(lián)合化療組（р=0.064）間比較無統(tǒng)計學差異，但顯著高于順鉑組（р=0.02）；而聯(lián)合化療組與順鉑組間比較無顯著性差異（р=0.47）。（9）槐耳清膏組CD44v6表達水平與對照組（р=0.34）和順鉑組（р=0.51）間比較均無顯著性差異，但顯著低于聯(lián)合化療組（р=0.000），順鉑組亦顯著低于聯(lián)合化療組（р

10、=0.001）。（1O）對照組人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981移植瘤瘤重顯著高于順鉑組（р=0.049）和聯(lián)合化療組（р=0.008），其余各組間瘤重比較均無顯著性差異（р＞0.05）?；倍甯嘟M抑瘤率為26.28％，順鉑組抑瘤率為40.5％，聯(lián)合化療組抑瘤率為57.3％。（11）開始給藥后第1-17天，不同藥物處理組移植瘤體積經(jīng)F檢驗無統(tǒng)計學差異，給藥后第18天時，不同藥物處理組間移植瘤體積比較有顯著性差異；順鉑組（р=0.008）

11、和聯(lián)合化療組（р=0.006）移植瘤體積均顯著低于對照組，其余各組間比較均無統(tǒng)計學差異（р＞0.05）；給藥后第22天時，不同藥物處理組間腫瘤體積比較有顯著性差異（р=0.043）；順鉑組（р=0.039）和聯(lián)合化療組（P=0.007）移植瘤體積均顯著低于對照組，其余各組間比較均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。（12）不同藥物處理組間移植瘤體積生長曲線比較有顯著性差異（P=0.049）；兩兩比較：對照組與順鉑組（P=0.027）和聯(lián)合化療

12、組（P=0.11）間移植瘤生長曲線比較有顯著差異，其余各組間比較均無顯著性差異（P>0.05）。（13）對照組移植瘤肺轉移灶個數(shù)平均為4.2個／只，槐耳清膏組為2.2個／只，順鉑組為1.4個／只，聯(lián)合化療組為1.2個／只。對照組肺轉移灶個數(shù)顯著高于槐耳清膏組（P=0.008），順鉑組（P=0.001）和聯(lián)合化療組（P=0.000），其余各組間比較均無顯著性差異（P>0.05）。（14）治療后對照組裸鼠體重平均增加2.14g，體重增加率為

13、8.50％；槐耳清膏組平均體重增加3.9g,體重增加率為15.36％；順鉑組平均體重增加-3.36g,體重增加率為-12.48％；聯(lián)合化療組平均體重增加1.14g,增加率為4.30％。不同藥物處理組間裸鼠體重增加均有顯著性差異（P<0.05）。 結論：（1）槐耳清膏能顯著誘導人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981的細胞凋亡，并將細胞阻滯于G0／G1期。（2）槐耳清膏能顯著上調人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981β-catenin和T