兔慢性心力衰竭心房肌細胞離子重構(gòu)和分子機制及厄貝沙坦的干預.pdf

1、本文分三部分論述了兔慢性心力衰竭心房肌細胞離子重構(gòu)和分子機制及厄貝沙坦的干預。 第一部分兔慢性心力衰竭動物模型的建立及厄貝沙坦的干預。 目的：用結(jié)扎左冠狀動脈室支建立新西蘭大白兔慢性心力衰竭(chronicheartfailureCHF，簡稱心衰)模型為CHF的心房離子重構(gòu)提供動物模型；觀察厄貝沙坦對CHF兔心功能及心房結(jié)構(gòu)的影響。 方法：對90只新西蘭大白兔分三組，一組手術同心衰組但不結(jié)扎冠狀動脈為假手術組(s

2、ham-operatedgroup,Sgroup)；一組進行左室支冠狀動脈結(jié)扎，12周后建立心衰模型為心衰組(heartfailuregroup,HFgroup)；第三組手術同心衰組，術后第二天起給予厄貝沙坦為厄貝沙坦組(irbesartangroup,Igroup)。三組在十二周后分別觀察動物死亡率和心衰的指標，所有動物使用超聲心動圖觀察術前、術后左室收縮未期內(nèi)徑(leftventricularend-systolicdiameter

3、，LVESD)、左室舒張未期內(nèi)徑(meleftventricularend-diastolicdiameter,LVEDD)、左室射血分數(shù)(ejectionfxaction,EF)、左房內(nèi)徑(1eRatriamdiameter,LAD)；在處死的動物觀察胸腹水的情況并同時測量心臟的重量、肝臟的重量和肺濕重；全細胞電壓膜片鉗測定心房細胞的膜電容表示心房細胞的大小。 結(jié)果：在實驗過程中，假手術組新西蘭大白兔死亡4只；心衰組死亡10只

4、：厄貝沙坦組死亡9例；總的死亡率為25．56％，心衰組和厄貝沙坦組死亡率無差別。心衰組與厄貝沙坦組12周心臟重量／體重、肝臟重量／體重、肺濕重／體重及LVEDD、LVESD高于假手術組，EF值較假手術組降低，差異有統(tǒng)計學意義。厄貝沙坦組肺濕重／體重、左室舒張未期內(nèi)徑、左室收縮未期內(nèi)徑小于心衰組，厄貝沙坦組EF值較心衰組升高。心衰組和厄貝沙坦組心房肌細胞膜電容和左心房內(nèi)徑大于假手術組(兩者P<0．01)。厄貝沙坦組左心房內(nèi)徑小于心衰組(P

5、

6、alciumcurrent，ICa-L)、瞬時外向鉀電流(Transientoutwardpotassiumcurrent，Ito)的變化及鈉鈣交換體(Na+-Ca2+exchanger,NCX)蛋白表達的變化，探討慢性心力衰竭房性心律失常增加的可能機制。觀察其離子通道孔道亞單位蛋白及mRNA表達的改變探討離子通道功能改變可能的分子機制。 方法：使用全細胞電壓膜片鉗分別記錄心衰組和假手術組INa、ICa-L和Itok的電流軌跡圖

7、并比較兩組INa、ICa-L和Ito的電流密度的改變。使用免疫印跡(Westcmblot)方法測定心衰組和假手術組心房肌鈉通道α亞單位、L型鈣通道的αlc亞單位和鈉鈣交換體的蛋白含量。使用反轉(zhuǎn)錄定量PCR方法測定心衰組和假手術組心房肌鈉通道Q亞單位、L型鈣通道的α1c亞單位、Ky4．3和鈉鈣交換體mRNA的表達含量。 結(jié)果：心衰組左心房肌細胞的INa的電流軌跡圖的激活電壓、峰值電壓及反轉(zhuǎn)電位與假手術組一致，但峰值電流減少。心衰組

8、左心房肌細胞的INa的電流密度在測試電壓為．50、40、．30、．20、．10(mV)時均小于假手術組(P均<0．01)，在測試電壓為-40mV心衰組的INa的電流密度較假手術組下降31．38％。心衰組左心房肌鈉通道Q亞單位蛋白含量較假手術組減少(P<0．01)，心衰組較假手術組下降28．6％。心衰組左心房肌表達鈉通道Q亞單位的mRNA少于假手術組(P<0．01)，心衰組較假手術組下降35．29％。心衰組和假手術組左心房肌細胞ICa-L

9、的電流軌跡圖激活電壓、峰值電壓及反轉(zhuǎn)電位無差別，但峰電流減少。心衰組和假手術組ICa-L的I-V曲線顯示心衰組的電流密度明顯低于假手術組，在測試電壓為．10、O、10、20、30、40rev時，心衰組的電流密度均明顯低于假手術組(在O、10、20、30rev時，P均

10、位蛋白含量低于假手術組(P<0．01)，與假手術組比較，心衰組左心房肌細胞L型鈣通道Qlc亞單位蛋白含量下降38．46％。心衰組心房肌細胞表達L型鈣通道的Q1c亞單位蛋白的mRNA低于假手術組(P<0．01)，心衰組L型鈣通道Q1c亞單位mRNA的含量較假手術組下降36．42％。心衰組和假手術組左心房肌細胞Ito的電流軌跡圖示兩者激活電壓、峰值電壓及反轉(zhuǎn)電位均相同，心衰組和假手術組k的I-V曲線顯示心衰組的電流密度在在測試電壓為．10,

11、0,10,20,30,40,50,60mV時明顯低于假手術組(P均<0．01)，在測試電壓為60rev，心衰組I幻電流密度較假手術組下降45．64％。心衰組Kv4．3mRNA低于假手術組(P<0．01)，心衰組Kv4．3亞單位mRNA的含量較假手術組下降50．32％。與假手術比較心衰組鈉鈣交換體膜蛋白表達升高84．62％(P<0．01)。心衰組鈉鈣交換體mRNA表達明顯大于假手術組(P<0．01)。 結(jié)論(1)心梗后心衰心房肌細

12、胞INa的電流密度降低，鈉通道的Q亞單位蛋白含量及mRNA含量下降；提示鈉通道孔道亞單位Q亞單位mRNA水平的下調(diào)是INa的電流密度降低的主要機制之一。(2)心梗后心衰左心房肌細胞ICa-L的電流密度降低；L型鈣通道Q1c亞單位蛋白含量及mRNA含量下降；提示L型鈣通道孔道亞單位Q1c亞單位的mRNA水平的下調(diào)是ICa-L電流密度下調(diào)主要機制之一。(3)心梗后心衰心房肌細胞I協(xié)的電流密度降低，其Ky4．3mRNA含量下降，Ky4．3mR

13、NA水平的下調(diào)是k的電流密度降低主要機制之一。(4)心梗后心衰左心房肌細胞鈉鈣交換體的蛋白含量及mRNA的含量明顯升高。(5)INa、Ito的下調(diào)和NCX蛋白表達的上調(diào)可能有助于房性心律失常的發(fā)生和維持。ICa-L的下調(diào)及NCX蛋白表達的上調(diào)可能使心房收縮力下降。 第三部分厄貝沙坦對心衰心房肌細胞離子重構(gòu)的影響。 目的：血管緊張素受體拮抗劑具有抑制房顫的作用，機制尚不清楚。本研究觀察心梗后心衰早期厄貝沙坦干預對慢性心力衰

14、竭心房離子重構(gòu)的作用探討其可能的抗房顫的機制。 方法：使用全細胞電壓膜片鉗方法分別觀察厄貝沙坦組、心衰組和假手術組左心房肌細胞INa、ICa-L、Ito的變化。使用反轉(zhuǎn)錄定量PCR方法觀察厄貝沙坦組、心衰組和假手術組左心房肌細胞鈉通道的Q亞單位、L型鈣通道的Q1c亞單位、Kv4.3和NCX的mRNA表達的含量。 結(jié)果：與心衰組比較厄貝沙坦組的INa電流密度降低的程度減輕(P<0．05)；鈉通道的Q亞單位mRNA表達有增加

15、的趨勢，但未達到統(tǒng)計學差異。與心衰組比較厄貝沙坦組L型鈣通道電流密度和L型鈣通道的α1c亞單位的mRNA的含量有升高的趨勢，但未達到統(tǒng)計學差異。與心衰組比較厄貝沙坦組的I協(xié)的電流密度增加(在測試電壓10、20、30、40mV時，P<0．05；在測試電壓50、60mV時，P<0．01)，但仍低于假手術組。與心衰組比較厄貝沙坦組的Ito的Kv4.3的mRNA的含量升高(P<0．01)，但仍低于假手術組。與心衰組比較厄貝沙坦組的NCX的mRN