骨形態(tài)計量學(xué)研究人參花蕾對骨質(zhì)疏松動物模型的影響.pdf

1、目的：
　　 分別建立去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型、D-半乳糖致雄性大鼠骨質(zhì)疏松模型，采用骨形態(tài)計量學(xué)方法、生物力學(xué)等觀察人參花蕾對大鼠骨組織的影響，并分別探討其作用機理。
　　 方法：
　　 1.人參花蕾防治去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松試驗
　　 選取5月齡未交配雌性SD大鼠60只，隨機分為6組。除假手術(shù)組外，其余行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。假手術(shù)組(Sham)和去卵巢組(OVX)給予溶劑對照，其余組分別予：利維愛(0.225m

2、g/kg/d，LV)、仙靈骨葆(270mg/kg/d，GB)、低劑量人參花蕾(0.486g/kg/d，GF(L))、高劑量人參花蕾(2.43g/kg/d，GF(H))，均灌胃給藥，連續(xù)12周。
　　 所有大鼠在處死前14、13天和4、3天分別皮下注射鹽酸四環(huán)素(25mg/kg)和鈣黃綠素(5mg/kg)進行熒光標(biāo)記。大鼠處死后取左側(cè)脛骨上段、第五腰椎和脛骨中段進行不脫鈣包埋后分別制成骨切片和骨磨片，通過半自動圖像分析系統(tǒng)進行骨組

3、織形態(tài)計量學(xué)測量；用858 Mini Bionix型材料測試系統(tǒng)分析大鼠右側(cè)股骨(三點彎曲法)的生物力學(xué)性能；將左側(cè)尺骨烘干、消化，分成兩份，檢測其骨鈣、磷以及骨膠原的含量。
　　 2.人參花蕾防治D-半乳糖致雄性大鼠骨質(zhì)疏松試驗
　　 3月齡的清潔級雄性SD大鼠53只，隨機分為5組，除正常對照組頸背部皮下注射生理鹽水5ml/kg/d外；其余組頸背部皮下注射D-半乳糖100mg/kg/d。正常對照組(NS，13只)和D-

4、半乳糖模型組(DG，10只)給予溶劑對照，其余組分別予：復(fù)方司坦唑醇(司坦唑醇0.54mg/kg/d+吡拉西坦432mg/kg/d，CP，10只)、低劑量人參花蕾(0.486g/kg/d，GF(L)，10只)、高劑量人參花蕾(2.43g/kg/d，GF(H)，10只)，均灌胃給藥，連續(xù)14周。
　　 雄性大鼠除用左側(cè)股骨檢測其骨鈣、磷以及骨膠原的含量外，其他處理均同去卵巢實驗大鼠。
　　 結(jié)果：
　　 1人參花蕾

5、防治去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松試驗
　　 1.1去卵巢對雌性大鼠骨組織的影響
　　 1.1.1脛骨上段松質(zhì)骨的變化
　　 與Sham組比較，OVX大鼠脛骨上段骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(％Tb.Ar)、骨小梁數(shù)量(Tb.N)分別降低了63.9％(P<0.01)、60.5％(P<0.01)。骨吸收參數(shù)每毫米破骨細胞數(shù)(Oc.N/mm)增加了143.2％(P<0.05)。骨形成參數(shù)％L.Pm、MAR、BFR/BS、BFR/BV分別增加

6、了139.4％(P<0.05)、39.1％(P<0.05)、249.5％(P<0.05)、303.8％(P<0.05)。
　　 1.1.2腰椎松質(zhì)骨的變化
　　 與Sham組比較，OVX大鼠腰椎％Tb.Ar、Tb.Th分別降低了41.9％(P<0.01)、38.0％(P<0.01)，Tb.Sp增加了31.1％(P<0.05)。骨形成及骨吸收參數(shù)變化不明顯。
　　 1.1.3脛骨中段皮質(zhì)骨的變化
　　 與S

7、ham組比較，OVX大鼠脛骨中段的％Ct.Ar下降了4.1％(P<0.05)，％Ma.Ar增加了16.3％(P<0.05)；骨內(nèi)膜的％E-L.Pm增加了273.7％(P<0.01)，骨外膜的動態(tài)參數(shù)無明顯變化。
　　 1.1.4股骨生物力學(xué)性能的變化
　　 與Sham組比較，OVX大鼠股骨的彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷分別下降了19.7％(P<0.01)、13.0％(P<0.01)、10.6％(P<0.05)，其他生物力

8、學(xué)指標(biāo)無明顯變化。
　　 1.1.5尺骨的變化
　　 與Sham組比較，OVX大鼠尺骨的濕重/體重比(BWW/BW)、干重/體重比(BDW/BW)分別降低13.2％(P<0.01)、11.9％(P<0.01)，但尺骨生化指標(biāo)均無明顯變化。
　　 1.2利維愛對去卵巢大鼠骨組織的影響
　　 1.2.1脛骨上段松質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，利維愛組Oc.N/mm減少了68.2％(P<0.05)。

9、％L-Pm、MAR、BFR/BS、BFR/BV分別降低了81.6％(P<0.01)、25.8％(P<0.05)、85.0％(P<0.01)、86.4％(P<0.01)，但靜態(tài)參數(shù)無明顯變化。
　　 1.2.2腰椎松質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，利維愛組骨小梁分離度(Tb.Sp)下降了18.2％(P<0.05)，但其他參數(shù)均無明顯變化。
　　 1.2.3脛骨中段皮質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，利維愛

10、組骨內(nèi)膜的％E-L.Pm降低59.2％(P<0.01)，但其他參數(shù)均無明顯變化。
　　 1.2.4股骨生物力學(xué)性能的變化
　　 與OVX組比較，利維愛組股骨彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷和剛性系數(shù)分別增加了65.9％(P<0.01)、17.3％(P<0.01)、16.0％(P<0.01)、129.8％(P<0.01)。
　　 1.2.5尺骨的變化
　　 與OVX組比較，利維愛組尺骨的BWW/BW、BDW/B

11、W分別增加23.9％(P<0.01)、24.3％(P<0.01)，單位骨干重中的骨鈣含量增加128.5％(P<0.05)，Ca/Hyp增加155.0％(P<0.05)。
　　 1.3仙靈骨葆對去卵巢大鼠骨組織的影響
　　 1.3.1脛骨上段松質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，仙靈骨葆組脛骨上段的靜態(tài)參數(shù)中％Tb.Ar、Tb.Th分別提高了62.6％(P<0.05)、26.6％(P<0.01)；骨形成參數(shù)MAR、B

12、FR/BV分別降低了30.4％(P<0.01)、36.4％(P<0.05)；但骨吸收參數(shù)無明顯變化。
　　 1.3.2腰椎松質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，仙靈骨葆組骨小梁厚度(Tb.Th)增加了30.0％(P<0.01)，但其他參數(shù)均無明顯變化。
　　 1.3.3脛骨中段皮質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，仙靈骨葆組脛骨中段皮質(zhì)骨的Ct.Ar增加14.3％(P<0.01)，但其他參數(shù)均無明顯變化。

13、r>　　 1.3.4股骨生物力學(xué)性能的變化
　　 與OVX組比較，仙靈骨葆組股骨彈性載荷、最大載荷、斷裂載荷和剛性系數(shù)分別增加了41.5％(P<0.01)、16.6％(P<0.01)、11.6％(P<0.05)、59.1％(P<0.05)，其他生物力學(xué)指標(biāo)無明顯變化。
　　 1.3.5尺骨的變化
　　 與OVX組比較，仙靈骨葆組尺骨物理指標(biāo)和生化指標(biāo)均無顯著變化。
　　 1.4人參花蕾對去卵巢大鼠骨組織

14、的影響
　　 1.4.1脛骨上段松質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，低劑量的人參花蕾可使去卵巢大鼠脛骨上段Tb.N增加47.1％(P<0.05)，而使％L.Pm、MAR、BFR/BS、BFR/BV分別降低了60.8％(P<0.05)、21.9％(P<0.01)、68.6％(P<0.05)、72.6％(P<0.01)，但骨吸收參數(shù)無明顯變化。高劑量的人參花蕾使％Tb.Ar、Tb.Th分別增加64.8％(P<0.05)、21

15、.7％(P<0.01)，使Oc.N/mm、％L.Pm、MAR、BFR/BS、BFR/BV分別減少了65.4％(P<0.05)、75.3％(P<0.01)、44.5％(P<0.01)、85.6％(P<0.01)、88.8％(P<0.01)。
　　 1.4.2腰椎松質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，低劑量組的％Tb.Ar、Tb.Th分別增加了49.3％(P<0.01)、36.5％(P<0.01)，而Tb.Sp下降了19.1％

16、(P<0.05)；高劑量組的Tb.Th增加了28.3％(P<0.01)。低、高劑量組骨形成及骨吸收的參數(shù)變化均不明顯。
　　 1.4.3脛骨中段皮質(zhì)骨的變化
　　 與OVX組比較，低、高劑量組人參花蕾大鼠的％Ct.Ar分別增加4.6％(P<0.01)、4.3％(P<0.01)，％Ma.Ar分別下降14.8％(P<0.01)和14.0％(P<0.01)；低、高劑量組的％E-L.Pm分別下降43.7％(P<0.05)和69.

17、0％(P<0.01)；％P-L.Pm、P-MAR、P-FBR/BS、E-MAR和E-FBR/BS均無明顯變化。
　　 1.4.4股骨生物力學(xué)性能的變化
　　 與OVX組比較，低劑量組的剛性系數(shù)增加139.7％(P<0.01)，高劑量組剛性系數(shù)、彈性載荷分別增加139.7％(P<0.01)，22.4％(P<0.05)，其他生物力學(xué)指標(biāo)無明顯變化。
　　 1.4.5尺骨的變化
　　 與OVX組比較，低劑量組尺

18、骨的BWW/BW、BDW/BW、Ca/Hyp分別增加8.7％(P<0.05)、8.1％(P<0.05)，82.5％(P<0.05)；高劑量組尺骨的BWW/BW、BDW/BW分別增加13.0％(P<0.01)、13.5％(P<0.01)。
　　 2人參花蕾防治D-半乳糖致雄性大鼠骨質(zhì)疏松試驗
　　 2.1 D-半乳糖對雄性大鼠骨組織的影響
　　 2.1.1脛骨上段松質(zhì)骨的變化
　　 與NS組比較，DG大鼠的

19、％Tb.Ar、Tb.Th分別降低了30.1％(P<0.01)、10.2％(P<0.05)，Tb.Sp增加了38.7％(P<0.01)。骨吸收參數(shù)方面，Oc.N/mm、％Oc.S.Pm分別增加了102.9％(P<0.01)和113.3％(P<0.01)。反映骨形成及骨礦化的參數(shù)變化不明顯。
　　 2.1.2脛骨中段皮質(zhì)骨的變化
　　 與NS組比較，DG大鼠的％Ct.Ar)下降3.9％(P<0.01)，％Ma.Ar增加16.

20、4％(P<0.01)。骨內(nèi)外膜的形成和礦化均無明顯變化。
　　 2.1.3股骨的理化特征及力學(xué)性能的變化
　　 與NS組比較，DG大鼠股骨BWW/BW、BDW/BW明顯降低(P<0.05)，骨鈣含量下降46.1％(P<0.05)。彈性載荷下降了10.4％(P<0.05)，其它骨生物力學(xué)指標(biāo)無明顯變化。
　　 2.2陽性對照藥復(fù)方司坦唑醇對D-半乳糖雄性大鼠骨組織的影響
　　 2.2.1脛骨上段骨的變化

21、r>　　 與DG組比較，CP組的％Tb.Ar、Tb.N分別升高了57.8％(P<0.01)、45.0％(P<0.01)，Tb.Sp減少了36.1％(P<0.01)。骨吸收參數(shù)方面，Oc.N/mm和％Oc.S.Pm分別減少了65.9％(P<0.01)和68.8％(P<0.01)。反映骨形成及骨礦化的指標(biāo)變化不明顯。
　　 2.2.2脛骨中段皮質(zhì)骨的變化
　　 與DG組比較，CP組的骨外膜的％P-L.Pm、P-MAR、P-

22、BFR/BS分別下降了36.9％(P<0.05)、27.8％(P<0.05)、56.1％(P<0.05)，骨內(nèi)膜的動態(tài)參數(shù)無明顯變化。皮質(zhì)骨骨量、骨髓腔大小無明顯變化，
　　 2.2.3股骨的理化特征及力學(xué)性能的變化
　　 與DG組比較，CP組的BDW/BW明顯增加(P<0.05)，彈性載荷增加了11.4％(P<0.05)，其它骨生物力學(xué)指標(biāo)無明顯變化。
　　 2.3人參花蕾對D-半乳糖雄性大鼠骨組織的影響

23、>　　 2.3.1脛骨上段松質(zhì)骨的變化
　　 與DG組比較，低、高劑量的人參花蕾分別使脛骨上段靜態(tài)參數(shù)中的％Tb.Ar增加36.3％(P<0.05)和44.1％(P<0.01)，Tb.Sp減少了24.7％(P<0.05)和27.2％(P<0.01)。低劑量組的Oc.N/mm和％Oc.S.Pm分別減少了55.1％(P<0.05)和65.6％(P<0.01)，高劑量組的Oc.N/mm和％Oc.S.Pm分別減少了77.5％(P<0.

24、01)和84.4％(P<0.01)。反映骨形成參數(shù)變化不明顯。
　　 2.3.2脛骨中段皮質(zhì)骨的變化
　　 與DG組比較，低劑量組人參花蕾的％Ct.Ar增加3.6％(P<0.05)、％Ma.Ar下降12.3％(P<0.05)，高劑量組人參花蕾的Ct.Ar、％Ct.Ar分別增加10.2％(P<0.05)、3.8％(P<0.05)、％Ma.Ar下降12.8％(P<0.05)。骨內(nèi)外膜的動態(tài)參數(shù)均無明顯變化。
　　 2

25、.3.3股骨的變化
　　 與DG組比較，低、高劑量組股骨BWW/BW明顯降低(P<0.05)，彈性載荷增加17.9(P<0.01)，其它骨生物力學(xué)指標(biāo)無明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1.5月齡SD雌性大鼠去除卵巢12周后，可產(chǎn)生高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松。脛骨上段、腰椎松質(zhì)骨和脛骨中段皮質(zhì)骨的骨量明顯丟失，骨顯微結(jié)構(gòu)退化，骨力學(xué)質(zhì)量有所下降。利維愛使去卵巢大鼠股骨的生物力學(xué)性能增強，對抗去卵巢大鼠尺骨的無機質(zhì)丟失；仙靈骨

26、葆能有效對抗去卵巢大鼠脛骨上段松質(zhì)骨的丟失增強股骨的生物力學(xué)性能，但對脛骨中段皮質(zhì)骨和腰椎骨丟失的作用不明顯。低、高劑量的人參花蕾能夠?qū)谷ヂ殉惨鸫笫蠊莵G失，預(yù)防骨質(zhì)疏松，低劑量對脛骨中段皮質(zhì)骨和腰椎作用明顯，高劑量對脛骨上段和脛骨中段皮質(zhì)骨作用明顯。
　　 2.每天連續(xù)給予皮下注射D-半乳糖100mg/kg14周，可明顯促進破骨細胞的骨吸收功能，導(dǎo)致骨明顯丟失；陽性對照藥物復(fù)方司坦唑醇有效預(yù)防D-半乳糖導(dǎo)致大鼠骨丟失的改變；