SASH1在人胃癌組織中的表達(dá)及RNAi抑制GES-1細(xì)胞中SASH1基因表達(dá)的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的： SASH1基因(SAM-and SH3-domain containing 1)是新發(fā)現(xiàn)的一種候選抑癌基因，本課題研究SASH1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)情況及構(gòu)建SASH1小干擾RNA表達(dá)載體以抑制SASH1基因在GES-1細(xì)胞中的表達(dá)。 方法： 1、收集94例手術(shù)切除胃癌組織及15例癌旁組織，采用免疫組化方法檢測SASH1蛋白表達(dá)情況，并分析SASH1表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系； 2、設(shè)計(jì)S

2、ASH1基因的RNAi干擾靶點(diǎn)，并利用psilencer 1.0-U6質(zhì)粒構(gòu)建2個SASH1小干擾RNA表達(dá)載體，分別命名為pSilencer-1.0-U6-SASH1-1和pSilencer-1.0-U6-SASH1-2； 3、通過LipofectamineTM2000將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1中，用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)比較重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后GES-1細(xì)胞增殖能力的改變，并用細(xì)胞免疫化學(xué)、RT-PCR檢測

3、轉(zhuǎn)染前后SASH1基因表達(dá)的變化，同時比較了轉(zhuǎn)染前后GES-1細(xì)胞BCL-2基因的表達(dá)變化情況。 結(jié)果： 1、胃癌組織中SASH1蛋白陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，兩者差異有顯著性(P=0.001)；SASH1在胃癌組織中的表達(dá)與浸潤深度(P=0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.001)、分化程度(P=0.021)及TNM分期(P=0.047)有關(guān)，而與年齡(P=0.513)和性別(P=0.720)無關(guān)； 2、轉(zhuǎn)染重

4、組質(zhì)粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1組的GES-1細(xì)胞72h、96h、120h用MTT法測得的增殖能力比對照組和pSilencer-1.0-U6-SASH1-2實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)(P<0.05)； 3、轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1組的GES-1細(xì)胞內(nèi)的SASH1基因的mRNA及蛋白表達(dá)水平下降，BCL-2基因的表達(dá)水平升高。 結(jié)論： 1、SASH1蛋白表達(dá)水平與胃癌臨床病理

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