亞硝酰胺類致癌劑誘導MGMT基因表達異常參與調控GEs-1細胞惡性轉化的研究.pdf

1、O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶(MGMT)是一種DNA損傷修復酶，獨立修復由環(huán)境污染物中N-亞硝基致癌劑或化療藥等引起的烷基DNA加合物損傷，通過直接轉移烷基DNA加合物上的烷基到自身參與修復過程，避免細胞發(fā)生致突變，致腫瘤及細胞毒性的損傷。亞硝酰胺類致癌劑(MNNG、MNU)是一種具有高活性的化學致突變致癌物，用于研究在環(huán)境中廣泛存在的N-亞硝酰胺類化學誘變物和致癌物的作用機制。該化合物能與DNA及蛋白質等生物大分子形成加合物，引

2、起基因組損傷，并最終導致基因突變、染色體畸變、細胞死亡，以及多種腫瘤的發(fā)生。
　　在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)，利用MNNG、MNU低劑量、多次暴露能誘導人胃正常上皮GES-1細胞的惡性轉化，并且伴有MGMT基因表達的持續(xù)上調。甲基化特異性PCR(MSP)及亞硫酸氫鹽測序(BSP)實驗均證明，MGMT啟動子區(qū)域(+93位點到+153位點)DNA甲基化水平MNNG、MNU誘導組較對照組明顯降低，提示表觀遺傳修飾機制參與調控MGMT在本模型中

3、的異常表達。染色質免疫共沉淀實驗證明，MNNG、MNU刺激抑制DNMT1與MGMT啟動子區(qū)的結合，同時伴有該啟動子區(qū)域內H3K9met2的修飾水平下降，H3K4met2水平上升。進一步證明表觀遺傳修飾機制調控在MNNG、MNU誘導的MGMT的表達上調的重要作用。此外，(O6-benzylguanine)O6-BG處理MNNG、MNU誘導組細胞，能顯著下調MGMT的表達水平，促進細胞惡性增殖能力的增強;隨后在誘導組細胞中轉染MGMT過表達

4、質粒，顯著抑制細胞的惡性增殖能力。另外，MGMT高表達及表達抑制的單克隆細胞株細胞增殖實驗也證實MGMT的表達水平與細胞惡性增殖呈負相關。
　　本研究證明亞硝酰胺類致癌劑刺激人胃正常上皮細胞，能誘導該細胞發(fā)生惡性轉化;通過抑制DNMT1蛋白與MGMT啟動子區(qū)的結合，降低MGMT啟動子區(qū)DNA甲基化水平，同時伴有組蛋白修飾調控的改變，如抑制基因激活相關的H3K9met2修飾的降低及促進基因激活相關的H3K4met2修飾的增加，持續(xù)激