HGF通過促進(jìn)DNMTs表達(dá)影響肝細(xì)胞肝癌的惡性表型及預(yù)后的研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是目前我國發(fā)病率和致死率位居第二位的惡性腫瘤，每年約有30萬例新發(fā)肝癌，約占全球發(fā)病率的50％以上。肝細(xì)胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是原發(fā)性肝癌的主要形式，約占肝癌病例的90％。目前對HCC發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的精確分子機(jī)制尚缺乏完整認(rèn)識，深入闡明其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的精確分子機(jī)制是目前肝癌研究的重要方向。
　　 目前普遍認(rèn)為HCC的發(fā)生是多因素、多途徑、多步驟長期作用的結(jié)果。在多

2、種致癌因素作用下，如HBV(HepatitisBvirus)和HCV(HepatitisCvirus)感染、黃曲霉毒素B1(aflatoxinB1，AFB1)攝入、酗酒和非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)等，伴隨著肝細(xì)胞損傷和肝臟微環(huán)境惡化，從而導(dǎo)致機(jī)體遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的累積性改變，最終造成HCC的發(fā)生，因此肝臟微環(huán)境的改變與肝癌的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)。在惡化的肝臟微環(huán)境中，異常

3、表達(dá)的肝細(xì)胞生長因子（HepatocyteGrowthFactor，HGF）、胰島素樣生長因子（Insulin-likeGrowthFactor，IGFs）、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TransformingGrowthFactor-β，TGF-β)等細(xì)胞生長因子，通過結(jié)合肝細(xì)胞表面相應(yīng)受體而激活一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在肝癌發(fā)生發(fā)展中起重要促進(jìn)作用。以染色質(zhì)共價修飾為主要標(biāo)志的表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)作為整合細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境因素與基因組遺傳信息的媒介，直接調(diào)控基

4、因表達(dá)，決定細(xì)胞增殖、分化。DNA甲基化和組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)重要的修飾形式，其中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyltransferases，DNMTs)是催化DNA甲基化造成抑癌基因表達(dá)沉默的重要調(diào)控分子。HCC中常表現(xiàn)出整體基因組廣泛性的DNA低甲基化，而在很多抑癌基因啟動子的CpG島位點(diǎn)卻發(fā)生特異性DNA高甲基化，提示DNA甲基化機(jī)制在導(dǎo)致抑癌基因沉默及惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。然而，肝臟微環(huán)境中細(xì)胞因子（如HGF）在

5、肝細(xì)胞的表觀遺傳中產(chǎn)生了怎樣的影響，以及是如何通過表觀遺傳學(xué)機(jī)制來調(diào)控肝癌惡性表型和預(yù)后的尚未清楚。因此，本研究從HGF調(diào)控DNMTs或DNA甲基化狀態(tài)的可能機(jī)制入手，來研究其對HCC惡性表型及預(yù)后的影響。
　　 在本課題中，主要從三個方面進(jìn)行研究:(1)DNMTs在HCC臨床樣本中的表達(dá)及其臨床意義;(2)DNMTs對HCC細(xì)胞系惡性表型的影響;(3)HGF如何調(diào)控DNMTs表達(dá)及其可能機(jī)制探討;(4)HGF通過DNA甲基化機(jī)

6、制調(diào)控的基因表達(dá)譜分析和相關(guān)靶基因鑒定。結(jié)果顯示，DNMT1和DNMT3B在HCC組織中表達(dá)明顯上調(diào)，與瘤旁組織比較，表達(dá)上調(diào)比例分別為83.15％(74/89)和85.39％(75/89)，并且表達(dá)量與生存期、甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)含量和病理分期等關(guān)鍵臨床指標(biāo)密切相關(guān)。同時，分析發(fā)現(xiàn)DNMT1表達(dá)上調(diào)與AKT通路激活呈正相關(guān)。在HCC細(xì)胞模型中發(fā)現(xiàn)，HGF能夠明顯上調(diào)DNMT1和DNMT3B蛋白水平表達(dá)，并能夠

7、調(diào)控細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和遷移等惡性表型。通過甲基化芯片和表達(dá)譜芯片分析，篩選并鑒定了多條通過HGF和DNA甲基化調(diào)控的候選腫瘤抑制基因(tumorsuppressorgene，TSGs)，如PTEN、PNMT、MYOCD、LHX9、PANX2等，為后續(xù)功能研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 本研究進(jìn)一步明確了DNMTs影響肝癌惡性表型和預(yù)后的理論基礎(chǔ)，從細(xì)胞生物學(xué)和組學(xué)角度探討了肝癌微環(huán)境中HGF影響肝癌惡性表型的表觀遺傳學(xué)機(jī)制，