乳腺浸潤性微乳頭狀癌中FEZ1-LZTS1基因的表達及啟動子區(qū)域甲基化的研究.pdf

1、[目的]： 研究FEZ1/LZTS1基因在乳腺浸潤性微乳頭狀癌（IMPC）中的表達，分析其與淋巴結轉移等相關病理學特征的關系；并從表觀遺傳學角度探討FEZ1/LZTS1基因啟動子區(qū)域甲基化在IMPC浸潤轉移過程中的作用。 [方法]： 采用免疫組織化學LSAB法檢測100例IMPC中Fez1/Lzts1蛋白的表達，選取100例非特殊型浸潤性導管癌（IDC-NOS）作為對照，比較Fez1/Lzts1蛋白在不同病理學類

2、型中表達的差異，分析IMPC中Fez1/Lzts1蛋白的表達與淋巴結轉移等相關病理學特征的關系；運用重亞硫酸鹽處理基因組DNA-PCR擴增-直接測序的方法檢測9例凍存的純型IMPC、9例混合型IMPC、9例正常乳腺組織及45例IDC-NOS腫瘤組織DNA中FEZ1/LZTS1基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)；同時采用DHPLC聯(lián)合測序方法對23例乳腺IMPC、30例IDC-NOS和2例正常乳腺組織中FEZ1/LZTS1基因組DNA編碼區(qū)進行突變

3、檢測。 [結果]： 1.IMPC組淋巴結轉移率顯著高于IDC-NCS組（Z=-5.655，P=0.000）。 2.IMPC組Fez1/Lzts1蛋白表達低于IDC-NOS組（X2=4.500，P=0.034）。 3.IDC-NOS中Fez1/Lzts1蛋白表達與淋巴結轉移、淋巴結分級，以及腫瘤大小顯著相關（P=0.000，P=0.002，P=0.035）。IMPC中Fez1/Lzts1蛋白表達也與淋巴結轉

4、移、淋巴結分級顯著相關（P=0.036，P=0.008）。 4.純型IMPC組與IDC-NOS組FEZ1/LZTS1基因啟動子區(qū)18個CpG位點的平均甲基化頻率（AML）都明顯高于正常乳腺組織（P=0.000，P=0.000）。并且純型IMPC組18個CpG位點的AML高于IDC-NOS組，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.692.P=0.011）。另外，純型IMPC組18個CpG位點中有3個位點（47、87、127）平均甲基化頻率高于

5、IDC-NOS組相應位點，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.048，P=0.040，P=0.045）。 5.純型IMPC組與混合型IMPC組無論是每個CpG位點的AML還是18個CpG位點的AML，兩者之間均無明顯差異。進一步將混合型IMPC按IMPC所占成分分為IMPC成分>50％組，和IMPC成分<50％組。兩組間FEZ1/LZTS1基因啟動子區(qū)平均甲基化頻率也無明顯差異。 6.轉移IDC-NOS和未轉移IDC-NOS間，F(xiàn)

6、EZ1/LZTS1基因啟動子區(qū)甲基化頻率差異有統(tǒng)計學意義（t=2.061，P=0.047）。 7.FEZ1/LZTS1基因第1外顯子擴增產(chǎn)物DHPLC篩查分析結果為1種峰型，未發(fā)現(xiàn)堿基改變。53例乳腺癌樣本中有25例（25/53）在第2外顯子擴增產(chǎn)物6544bp處有C→T的堿基改變，但此堿基改變位于內含子。此外，在1例腫瘤樣本中檢測到第3外顯子擴增產(chǎn)物3927bp處有C→G的堿基改變，為亮氨酸（Leu）到纈氨酸（Val）的改變；

7、在第3內含子3540bp處有G→A的堿基改變。 [結論]： 1.Fez1/Lzts1蛋白表達的缺失/下降與IMPC的高淋巴結轉移特性相關。 2.啟動子區(qū)域的高度甲基化可能是促進Fez1/Lzts1蛋白表達缺失/下降的主要原因之一。 3.FEZ1/LZTS1基因轉錄起始點附近的某些CpG位點可能在IMPC中起到關鍵作用，我們推測這幾個位點發(fā)生的甲基化使IMPC較IDC-NOS有著更高的淋巴結轉移率。